一. 實驗目的
了解用聚乙二醇PEG方法誘異同種植物原生質體融合的技術，并能根據新本原生質體的形態樗來鑒別雜種細胞。
二. 實驗原理
不同種植物的原生質體可在人工誘導條件下融合，所產生的雜種細胞，即異核體經過培養可再生新壁，分裂形成愈傷組織，進而分化產生雜種植株。由于進行融合的原生質體來自體細胞，故該項技術也叫體細胞雜交。原生質體融合能使有性雜交不親合的植物種間進行廣泛的遺傳重組，因而在農業育種上具有巨大的潛力。在植物遺傳操作研究中也是關鍵技術之一。
人工誘導原生質體融合可使用物理學方法，如運用細胞融合儀，在電場誘因導下實現融合，然而至今廣為使用的仍是聚乙二醇（PEG）溶液引起原生質體的聚集和粘連，然后用高pH鈣溶液相處理的化學方法（Kao等，1974）。該法應用分子量至為1500~6000的聚乙二醇（PEG）溶液引起原生質體的聚集和粘連，然后用高pH的鈣溶液稀釋時，就產生了高頻率的融合，融合的頻率和省略常與所有PEG的分子量、濃度，作用時間，原生質體的生理狀態與密度以及操作者的細心程度有關。
三、實驗材料與儀器
1． 實驗材料：
煙草或其它植物無菌苗的葉片。
胡蘿卜肉質根誘導的松軟愈傷組織或懸浮培養細胞。
2．試劑
2.1 酶液及洗滌液，同植物原生質體的分離和培養實驗。
2.2 PEG溶液

Tris(緩沖液) 0.05mol/L
PH調至10.5
2.4 DPD培養基同植物原生質體的分離和培養實驗。
四、實驗方法
所有操作均在超凈工作臺上進行。
1． 原生質體的分離和收集。參看植物原生質體分離和培養實驗。
2． 將收集的兩種不同材料的原生質體分別懸浮在0.16mol/L的CaCl2·2H2O（pH5.8~6.2）原生質體密度調整為2×105/ml左右（用血細胞計數板統計原生質體密度）。
3． 將兩種原生質體懸液等量混合。
4． 用刻度吸管將混合的原生質體懸液滴在直徑為60mm的平皿中，每皿滴7~8滴，每滴約
0.1ml。然后靜置10in，使原生質體巾在皿底上，形成一薄層。（應有3~5個平皿的重復）。
5． 用吸管將等量的PEG溶液緩慢地加在原生質體液滴上，再靜置10~15min。此時可取一個平皿在倒置顯微鏡上觀察原生質體間的粘連。
6． 用刻度吸管向原生質體液滴慢慢地加入高pH、商鈣稀液。*次加0.5ml，第2次1ml，第3、4次各2ml，每次之間間隔5min。
7. 將平皿稍微傾斜，吸去上清液，再緩緩加入4ml稀釋液。5min后，再傾斜平皿，吸去上清液注意吸去上清液時勿使原生質體漂浮起來。
8. 用DPD培養基如上法換洗二次。
9. 每平皿中加培養基2ml，輕輕搖動平皿。
10.用蠟膜密封平皿。置260下進行24h暗培養，然后轉到弱光條件下培養。
實驗結果
1． 在倒置顯微鏡下觀察異源融合。在培養3天以內，可根據雙新原生質體的形態特征來鑒別異核體。因為來自葉肉組織的原生質體具有明顯綠色葉綠粒，而來自培養細胞的原生質體無色，但具濃密原生質絲，并可看到顯示的核區。
2． 統計異源融合的頻率