1、問：請問有人養(yǎng)過CHO細(xì)胞嗎？文獻(xiàn)報道說用DMEM培養(yǎng)基來養(yǎng)，但我不太清楚具體是高糖還是低糖？

參考見解：CHO細(xì)胞用高糖DMEM養(yǎng)就可以了，比較好養(yǎng)，10%血清，小牛和胎牛都可以，長得比較慢，跟你所用的血清有一定的關(guān)系，大概需要兩天傳一次代。在塑料板上比玻璃板上好養(yǎng)，感覺如果在玻璃板上養(yǎng)而且不包被的話，好像細(xì)胞不易伸展開來。

2、問：要轉(zhuǎn)染鉀通道pcDNA3.1入細(xì)胞，是選cho細(xì)胞呢還是hek293細(xì)胞？cho細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率高嗎？

參考見解：表達(dá)一個蛋白的時候，首先要確認(rèn)你的蛋白確實(shí)表達(dá)了，因?yàn)橛泻芏嘣蚩梢詫?dǎo)致蛋白表達(dá)出問題（質(zhì)粒序列有錯誤，質(zhì)粒純度低，表達(dá)的蛋白不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)染效率太低等）。所以在做任何功能性實(shí)驗(yàn)之前，必須要先確認(rèn)蛋白的表達(dá)，通常的實(shí)驗(yàn)有：

（1）采用免疫熒光法。由于需要熒光二抗，比較貴。但直觀，可以確定轉(zhuǎn)染效率，采用好的顯微鏡時，可以大致知道表達(dá)蛋白在細(xì)胞中的位置。

（2）WESTERN-BLOT。可以確認(rèn)表達(dá)的蛋白分子量，以及表達(dá)的量。但不直觀。

（3）構(gòu)建一個N或C端帶熒光蛋白的質(zhì)粒。這樣比較費(fèi)時間，同時攜帶的熒光蛋（通常使用GFP）有可能干擾蛋白的正常功能。但好處是轉(zhuǎn)染后可以很方便的觀察轉(zhuǎn)染效率，蛋白在細(xì)胞中的位置等。

當(dāng)然以上方法都無法知道質(zhì)粒有無發(fā)生突變，所以如果你的蛋白有表達(dá)但沒有功能，首先要做一個DNA測序確認(rèn)你的序列沒有問題。事實(shí)上質(zhì)粒發(fā)生突變的機(jī)會比大多數(shù)人想象的要多得多！

3、問：由于我要用CHO細(xì)胞生產(chǎn)基因工程抗體，用什么培養(yǎng)基能夠很好的使之良好的生長

參考見解：培養(yǎng)CHO細(xì)胞用F12，并且由于F12中加入了一些微量元素與無機(jī)離子，因此可以在血清很少的情況下應(yīng)用，是無血清培養(yǎng)中常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，特別適合進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)。我們的前輩曾用F12在無血清的條件下成功的克隆出CHO細(xì)胞。

無血清培養(yǎng)CHO細(xì)胞有兩種方法：一種是直接向試劑公司購買只適用于培養(yǎng)CHO細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基（好像HyClone就有）；第二種方法實(shí)際上是有血清培養(yǎng)，只不過血清濃度很低罷了，可以近似的認(rèn)為無血清。在第二種方法里，又可以分出兩條途徑：你可以分步進(jìn)行，也可以一步到位。分步法是，CHO細(xì)胞先在含10％血清的常規(guī)培養(yǎng)基里培養(yǎng)，再到含5％血清的培養(yǎng)基里培養(yǎng)，再到含2.5％血清的培養(yǎng)基里培養(yǎng)，依此類推，培養(yǎng)基里的血清不斷下降，直到一個能讓CHO細(xì)胞良好生長的zui低血清濃度。一步到位法就是省去中間的步驟，直接由起點(diǎn)的血清濃度到終點(diǎn)濃度。

4、問：我要做穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，表達(dá)融合蛋白并將蛋白質(zhì)純化來檢測其功能。僅僅把目的基因插入pcDNA3.1，沒有插入其他的基因或者tag。現(xiàn)準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞。就相關(guān)問題想問問：

有的文獻(xiàn)上沒有署名K1或是DHFR,普通所寫的CHO細(xì)胞是指那種？野生型CHO細(xì)胞又是指的哪種？這三種細(xì)胞是不是因?yàn)镃HO-K1和CHO/DHFR-有擴(kuò)增基因GS 和DHFR,可以更為有效的擴(kuò)增進(jìn)而表達(dá)，比野生型CHO在轉(zhuǎn)染中更起作用？

如果就我的實(shí)驗(yàn)要求，CHO-K1或者CHO/DHFR-更加適合，那么轉(zhuǎn)染CHO-K1是不是可以直接轉(zhuǎn)染？而轉(zhuǎn)染CHO-DHFR-需要和攜帶DHFR-的標(biāo)記質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染？

參考見解：做穩(wěn)定表達(dá)是需要把目的基因克隆到一定的載體上的，這個載體同時可以過表達(dá)一個抗性基因，如果載體整和到基因組上，這個抗性已經(jīng)能夠克服篩選壓力，而這個時候你的目的蛋白也得到了有效的表達(dá)。

（1）野生型CHO就是ＣＨＯ－Ｋ１

（2）CHO－DHFR-是指ＤＨＦＲ缺陷型細(xì)胞，ＤＨＦＲ作為篩選標(biāo)記．

（3）你用pcＤＮＡ3.1的話,可以直接轉(zhuǎn)染CHO-K1,加G418篩選即可.