1將含pETBlue－2的單菌落接入3mL LBAmp+液體培養基中，37℃振蕩培養過夜。讓菌蘇醒，增加菌的數量。 2培養的菌液，6000rpm，離心2min。去上清收集沉淀。收集、濃縮菌體。 3100 uL溶液I充分重懸菌體。這一步僅僅是為了吹散細胞。 4200uL溶液II，反復顛倒混勻（切勿旋渦振蕩！），冰上放置，裂解至菌液變清。
利用堿法破碎細胞和提取質粒。

堿法破碎細胞是因為NaOH可以破壞細胞膜糖苷鍵，SDS可以破壞膜、變性膜蛋白。

堿法提取主要是利用共價閉合環狀質粒與線性染色質在拓撲學上的差異來分離它們，在堿性pH，DNA變性，恢復中性時，基因組染色體DNA不能準確復性，與其它大分子共沉淀，而質粒dna卻可以準確復性，留在上清中。

這一步之后，細胞破碎，液體中將不會有沉淀而澄清。 因為細胞破碎，核基因組也釋放到液體中，如果強烈震蕩，會使核基因組因機械剪切斷裂為小片斷，在以后的離心中，不能與質粒分開，從而污染質粒。所以，要輕搖。

5加入150uL溶液III，反復顛倒混勻，冰浴5分鐘。高鹽（K+）。 這就是DNA復性。基因組染色體DNA不能準確復性，與其它大分子共沉淀，而質粒DNA卻可以準確復性，留在上清中。 612000rpm，離心10min。小心取出上清。這時上清中有質粒、還有雜質的蛋白、脂類、糖類、可溶的小分子。 7向上清中加入等體積酚：氯仿：異戊醇(25：24:1)，劇烈振蕩混勻，12000 rpm，離心10 min，將上清轉移到另一離心管中。異戊醇防止液體在振搖時起泡；酚可以變性蛋白質并使其沉降；氯仿可以提取脂類，液體分層。 這里得酚是tris飽和酚，這樣的酚飽和了水，不會抽提水層中的水，以致將DNA一并抽到有機層。Tris還可以起到調節PH稍微偏堿的作用。 這時蛋白質沉淀于兩層之間（密度的原因）。 標記離心方向，因為沉淀有時看不見，而我們吸取液體是要從沉淀的反方向。 8上清中加入等體積氯仿：異戊醇(24:1) ，劇烈振蕩混勻，12000rpm，離心10 min，將上清轉移到另一離心管中。去除酚，因為酚會影響雙酶切酶的活性。 9上清中加入2倍體積無水乙醇劇烈振蕩混勻，室溫放置15 min沉淀DNA。12000rpm，離心10 min，棄上清。脫水，因為液體中含有大量的鹽（溶液III），使DNA和RNA沉淀下來。而液體中委要出去的小分子、剩余的糖和脂。 10沉淀用1mL75%乙醇洗兩次(12000rpm，離心5 min)。 11沉淀充分干燥。用20uL RTE(TE中含有20ug/ml的RNase)，溫和振蕩幾秒鐘，－20 oC保存。 RNase可以去除RNA 12電泳檢測純化的質粒載體（1 % Agarose）。80V
2uL質粒DNA + 1uL 10xloading + 0.5uL SYBR + 2 uL無菌水

結果用凝膠成像儀分析照相

可以測OD值