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一、Feulgen氏染色法: 該方法是顯示DNA的一種常用方法。其基本原理是在酸水解下,去DNA中的嘌呤,使脫氧核酸的醛基暴露出來,然后再與Schiff氏試劑反應(yīng),生成紫紅色產(chǎn)物,用于顯微分光光度計和流式細(xì)胞測量計對細(xì)胞進(jìn)行靜態(tài)DNA測量和流式細(xì)胞測量。
操作方式: (1)切片常規(guī)脫蠟至水。(2)蒸餾水洗,1NHCI水溶稍洗。(3)浸入1NHCI水溶液60℃,8-10分鐘。(4)取出后,1NHCI水溶液稍洗,蒸餾水洗數(shù)次。 (5)入Schiff氏液中室溫下,暗環(huán)境30-90分鐘。 (6)流水沖洗數(shù)分鐘。 (7)常規(guī)脫水、封片。
結(jié)果:DNA呈紫紅色。
注意事項: 1、1NHCL、Schiff液的配制方法見前。 2、該染色的優(yōu)劣很關(guān)鍵。在于組織的固定。用甲醇85ml,福爾馬林10ml,冰醋酸5ml配制的固定液效果很好。此外1NHCL液中酸化時間需嚴(yán)格控制。 3、5%亮綠淡復(fù)染,使胞漿及其它組織呈綠色。
二、核仁組成區(qū)蛋白顯示法(PLOTON改良法) 核仁組成區(qū)(Nucleolar Organier regions,NORS)是轉(zhuǎn)錄核糖體RNA(rRNA)的染色體片斷并與嗜銀酸性非組蛋白有關(guān)。核糖體RNA基因直接控制著核糖體和蛋白質(zhì)的合成,因此,計數(shù)細(xì)胞內(nèi)的AgNORS的數(shù)量可反映細(xì)胞增殖的情況。經(jīng)典的方法是經(jīng)Plotor改進(jìn)的銀染法。
操作方法: (1)切片脫蠟入水。 (2)蒸餾水洗。 (3)去離子水洗。 (4)切片至ploton氏銀液中室溫下,暗環(huán)境60-90分鐘。 (5)去離子水洗。 (6)蒸餾水洗。 (7)常規(guī)脫水封片。
結(jié)果:AgNORS位于細(xì)胞核內(nèi)呈黑色的顆粒狀。 試劑的配制: 1、1%甲酸、2%明膠溶液(甲液) 甲酸 1ml 明膠 2g 去離子水 100ml 2、50%硝酸銀(乙液) 硝酸銀 50g 去離子水 100ml 3、ploton氏銀溶液 將甲液與乙液按1:2的比例于臨用前混為ploton氏銀溶液。
注意事項: 1、所用器皿需經(jīng)酸缸清洗。 2、甲液配制時,應(yīng)先按1%的濃度配制好甲酸液,再以此作為溶液溶解明膠。 3、有人用雙蒸水替代去離子水也可達(dá)到上述效果。 4、銀染后,用0.1%氯化金調(diào)色1-3秒,可使背景變清,效果更佳。
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