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上海紀寧實業有限公司
閱讀:1021發布時間:2014-4-8
兔抗人血清抗體的制備和效價測定的實驗原理
凡能刺激機體產生抗體,并能與抗體發生特異性結合的物質稱為抗原。物質所具有的這種特性稱為抗原性(Antigenicity)。當機體受抗原刺激后,在體液中出現的一種能與相應抗原發生反應的球蛋白,稱免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)。含有免疫球蛋白的血清稱免疫血清。
醫學上常見的抗原物質,種類很多,如病原微生物及其代謝產物(毒素),異種動物血清(各種抗毒素,免疫血清的來源),同種血型抗原,同種異體皮膚,器官等組織抗原,自身組織抗原,腫瘤細胞抗原。具有抗原性的各種化學成分有蛋白質、脂蛋白、多糖體、脂多糖、糖蛋白、多肽以及核蛋白等,這些抗原物質均可刺激機體產生抗體或細胞免疫反應。
機體在抗原物質的刺激下產生特異性免疫反應的過程,大體上可分為3個階段。
1.致敏階段(加工處理抗原階段):當顆粒性抗原初次進入人體內時,首先被巨噬細胞吞噬(可溶性抗原可直接被T淋巴細胞吞飲,多糖與鞭毛抗原物質可直接作用于B淋巴細胞)。通過巨噬細胞漿內溶酶體酶的作用,把抗原物質消化降解,而保留其抗原決定簇(特異性抗原成分)。經過加工處理的抗原分子結構比原來的小,抗原性卻比原來的加強。當處理過的抗原與巨噬細胞的RNA結合成為抗原-RNA復合物(抗原信息),就具有強烈吸引免疫活性細胞的作用,能把抗原-RNA復合物傳遞給免疫活性細胞(Immunologically competent cell),啟動免疫反應。
2.反應階段(淋巴細胞分化增殖階段):免疫活性細胞在受到抗原信息的刺激后,發生母細胞化,進而大量增殖。由于抗原的性質不同,刺激T細胞分化成致敏淋巴細胞。抗原信息刺激B細胞使分化成漿細胞。在分化過程中小部成為“記憶”細胞。由于“記憶”細胞的存在,即使抗原在漿內消失很久(數月至數年或更長)以后,仍能與再度進入體內的相應抗原迅速引起較強的免疫反應(回憶反應)。
3.效應階段(發生免疫反應階段):當致敏淋巴細胞再次遇到相應抗原的刺激后,能釋放出多種具有生物活性的物質(淋巴因子),參與細胞免疫反應;漿細胞可形成各種類型的免疫球蛋白(抗體),參與體液免疫反應。
在免疫期間,不僅各個不同的動物,而且同一動物在不同的時間內抗血清效價、特異性、親合力等都可能發生變化,因而必須經常地采血測試。只有在對抗血清的效價、特異性、親合力等方面作*的評價后,才可使用所取得的抗血清。
兔抗人血清的效價,就是指血清中所含抗體的濃度或含量。效價測定的方法常用的是放射免疫法,此法對所有的抗體均適用。某些由大分子(如蛋白類)抗原所產生的抗體,可用雙擴散等方法測定。本實驗采用雙向免疫擴散法測定效價。
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