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人單純皰疹病毒I型抗體IgM(HSV-1 IgM)Elisa

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人單純皰疹病毒I型抗體IgM(HSV-1 IgM)Elisa操作步驟
1.  編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照 1
孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同) 
2.  加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50$l。然后在待測(cè)樣品孔先
加樣品稀釋液 40$l,然后再加待測(cè)樣品 10$l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不
觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻, 
3.  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。    
4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 
5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5次,拍干。 6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50$l,空白孔除外。  
7.  溫育:操作同 3。 
8.  洗滌:操作同 5。 
9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50$l,再加入顯色劑 B50$l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10 分鐘. 
10.  終止:每孔加終止液 50$l,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 
11.  測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行

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人單純皰疹病毒I型抗體IgM(HSV-1 IgM)Elisa計(jì)算和結(jié)果判定: 
   試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10 
   臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15 
   陰性判定:樣品OD值<  臨界值(CUT OFF)者為單純皰疹病毒 I型抗體 IgM(HSV-1 
IgM)陰性 
   陽(yáng)性判定:樣品OD 值≥  臨界值(CUT OFF)者為單純皰疹病毒 I型抗體 IgM(HSV-1 IgM)陽(yáng)性 


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