ELISA試劑盒檢測系統(tǒng)是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中zui為靈敏的技術(shù)手段，有著十分重要的作用。操作步驟雖然看起來比較簡單但是實驗過程有很多的操作要點需要掌握，操作步驟中如果稍有不慎，操作不合理的地方，就會造成很多問題從而影響到檢測的準確性，大大降低試驗質(zhì)量。
1、問：做間接Elisa法測試小鼠血清中的IgE抗體，設(shè)空白對照、和陰性對照、陽性血清稀釋倍數(shù)為5千、1萬、10萬、20萬不等，用的是*標記的羊抗鼠IgE抗體，和親和素的辣根過氧化物酶。可是結(jié)果除了空白對照孔沒有顏色外，其余各孔全有顏色，而且OD值都相差不大，為什么?
回答：可能原因如下：
（1） 水質(zhì)被金屬離子等污染;防止辦法盡量使用新鮮水或蒸餾水。
（2） 洗滌不充分，樣品中其它成分殘留或酶殘留;防止辦法洗滌液應(yīng)注滿微孔，充分洗滌。
（3） 移液頭重復(fù)使用，未洗凈或消毒不*; 防止辦法移液頭一次性使用。
（4） 酶標板靈敏度過高。
（5） 一抗顯色時間的控制等等，關(guān)于ELISA試劑盒的每一步都要注意才行。
2、ELISA試劑盒加樣時的防錯小經(jīng)驗
（1）用一張寫滿字的紙，字越多越好，比如報紙，墊在下面，這樣，加過標本的小孔看過去下面的字會變小，沒加的字正常，非常容易區(qū)分。
（2）可以利用液面反光與沒有加的孔加以區(qū)別
（3）在標本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面產(chǎn)生小氣泡，也可以加以區(qū)分
3、棋盤試驗的操作方法:
（1）將抗原按一定的梯度倍比稀釋后，按照ELISA從上到下（或者從左到右）的順序包被。
（2）將抗體按一定的梯度倍比稀釋后按照ELISA從左到右或者從上到下加入。
（3）二抗的稀釋倍數(shù)是一定的，然后顯色，讀值。
OD值的測定時，波長要根據(jù)顯色劑的不同而定，一般上大家都使用TMB顯色，450nm讀值。根據(jù)讀值得結(jié)果可以選定合適的抗原和抗體效價，這就是棋盤 實驗的目的，如果抗原包被量已知而二抗的工作濃度不確定的話就用一抗和二抗作棋盤試驗。
