人細小病毒B19核酸擴增檢測試劑盒
 
適用于檢測人血清、羊水等樣本中人細小病毒B19 (HPV-B19 )DNA，用于人細小病毒B19 (HPV-B19)感染的輔助診斷及其感染病人藥物治療的療效監控。其檢測結果僅供臨床參考。
【使用方法】
1．DNA提取
血清或羊水:充分混勻上述標本，取100μl羊水或血清轉移至1.5ml離心管中，加入100μl核酸提取液A， 13,000rpm離心5分鐘，棄上清(勿碰及下面沉淀)，沉淀加50μl核酸提取液B(DNA) 充分混勻（提取液用前需室溫溶解并充分混勻）后100℃10分鐘，后13,000rpm離心3分鐘，取上清液3μl做PCR反應。
陰性質控品：取50μl陰性質控品，加50μl核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液3μl做PCR反應。
HPV-B19陽性質控品：直接取3μl進行PCR擴增，或按照PCR擴增介紹方法進行定量分析。
2．PCR擴增
根據標本量取HPV-B19-PCR反應管，加入處理后樣品3μl，1,0000rpm瞬時離心30秒。將各反應管放入PCR儀器的反應槽內，按對應順序標記陰性質控品，HPV-B19-陽性質控品及未知標本，循環條件如下:
94℃→2分鐘，后93℃ 30秒→58℃30秒→72℃ 30秒，共35個循環。
人細小病毒B19核酸擴增檢測試劑盒 3．電泳檢測
3.1 2%瓊脂糖凝膠配制：稀釋50×TAE（或5×TBE）至1×TAE(取20ml50×TAE，加980 ml雙蒸水至1L)，稱4g瓊脂糖放于500mL 錐形瓶中，1×TAE 200 ml,置入微波爐中加熱熔解(避免加熱沸騰溶液外溢)，再加入20μl 溴化乙錠(EB)充分混勻。在電泳槽內放好梳子，倒入瓊脂糖凝膠，待凝固后使用。
3.2 電泳檢測：直接取PCR 擴增產物15μl，用加樣槍點樣于瓊脂糖凝膠孔中，以5V/cm 電壓，1×TAE中電泳，紫外燈下觀察結果。
4. 結果判斷
陰性質控品無帶出現(引物帶除外)，HPV-B19-陽性質控品出現302bp 擴增帶，若被檢樣品出現302bp 擴增帶為人細小病毒B19陽性，否則為陰性。

人細小病毒B19核酸擴增檢測試劑盒  【標本采集、保存和運輸】
1. 適用標本類型：血清、羊水等。
2. 標本采集：
血清：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血1毫升，注入無菌2ml干燥管(或含促凝成分)，室溫靜置1小時，3000g離心3分鐘，可取上清立即用于測試；或吸取上部血清(約200μl)轉入無菌1.5ml Eppendoff管，保存待檢。
羊水：用無菌注射器取羊水3-5ml，轉至5ml潔凈離心管中，密封送檢。
3. 保存和運輸：標本可立即用于測試， 2-8℃保存下不應超過24小時； -70℃以下長期保存。避免反復凍融。標本運送時應采用0℃冰壺。
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