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巨噬細胞原代培養
一、原理
在不加任何條件下直接凍存細胞時，細胞內和外環境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下，能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
細胞復蘇時速度要快，使之迅速通過細胞zui易受損的－5～0℃，細胞仍能生長，活力受損不大。
目前常用的保護劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油，它們對細胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細胞。

ATCC細胞,傳代細胞

人肺退行性癌細胞，Calu-6細胞
人肺腺癌細胞，NCI-H1395細胞
人非小細胞肺癌細胞，NCI-H358細胞
人非小細胞肺癌細胞，HCC827細胞
人典型小細胞肺癌細胞，NCI-H1688細胞
人非小細胞肺癌細胞，NCI-H1299細胞
人胚肺二倍體細胞，2BS細胞
人支氣管上皮樣細胞，BEAS-2B細胞
人胚肺成纖維細胞，CCC-HPF-1細胞
人胚胎氣管組織來源細胞，CCC-HBE-2細胞
人肺腺癌細胞，Calu-3細胞
人小細胞肺癌細胞，DMS 153細胞
人高轉移肺癌細胞，95-D細胞
人低分化肺腺癌細胞，GLC-82細胞
人肺細胞，HLF-a細胞

二、操作步驟
凍存:
1.消化細胞（同實驗二），將細胞懸液收集至離心管中。
2.1000rpm離心10分鐘，棄上清液。
3.沉淀加含保護液的培養，計數，調整至5×106/ml左右。
4.將懸液分至凍存管中，每管1 ml。
5.將凍存管口封嚴。如用安瓿瓶則火焰封口，封口一定要嚴，否則復蘇時易出現爆裂。
6.貼上標簽，寫明細胞種類，凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細繩。
7.按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘〕→冰箱冷凍室（30分鐘）→低溫冰箱（－30℃ 1小時）→氣態氮（30分鐘）→液氮。
注意：操作時應小心，以免液氮凍傷。液氮定期檢查，隨時補充，不能揮發干凈，一般30立升的液氮能用1～1.5月。
復蘇:
1、準備一個茶缸或1000ml的燒壞，內裝2/3杯37℃的溫水。
2、從液氮中取出凍存管、迅速置于溫水中并不斷攪動。使凍存管中的凍存物在1分鐘之內融化。
3、打開凍存管，將細胞懸液吸到離心管中。
4、1000rpm離心10分鐘，棄去上清液。
5、沉淀加10ml培養液，吹打均勻，再離心10分鐘，棄上清液。
6、加適當培養基后將細胞轉移至培養瓶中，37℃培養，第二天觀察生長情況。
試劑和器材:
器材：液氮罐、凍存管（塑料螺口凍存管或安瓿瓶）、離心管、吸管、離心機等
試劑：0.25％胰酶、培養基、含保護劑的培養基（即凍存液）
附：凍存液配制：
培養基加入甘油或DSMO，使其終濃度達5—20%。保護劑的種類和用量視不同細胞而不同。配好后4℃下保存。

人肺鱗癌細胞 NCI-H520細胞
人肺巨細胞癌高轉移細胞株 PG-BE1細胞
人肺巨細胞癌低轉移細胞株 PG-LH7細胞
人肺癌細胞 A-427細胞
人低分化肺腺癌細胞 SK-LU-1細胞
人肺支氣管癌細胞 NCI-H1650細胞
人非小細胞肺腺癌細胞 NCI-H1975細胞
人非小細胞肺腺癌細胞 NCI-H2087細胞
人小細胞肺癌細胞 NCI-H2227細胞
人非小細胞肺癌細胞 NCI-H23細胞
人肺腺鱗癌細胞 NCI-H596細胞
人非小細胞肺癌細胞，NCI-H838細胞
人肺鱗癌細胞 LTEP-s細胞
人小細胞肺癌細胞 LTEP-sm細胞
人肺鱗癌瘤株 LTEP-s細胞
人肺鱗癌細胞 NCI-H1703細胞
人肺鱗癌細胞 NCI-H2170細胞
人非小細胞肺癌細胞 NCI-H524細胞
人肺腺癌細胞 SPC-A1細胞
人肺癌細胞 A549細胞
人非小細胞肺癌細胞 H125細胞
人肺癌細胞 H1299細胞
人肺癌細胞 TKB-1細胞
人肺腺癌細胞，LTEP-a-2細胞
人肺腺癌細胞，Lu-165細胞
人大細胞肺癌細胞，NCI-H460細胞
人肺腺癌細胞，SPC-A-1細胞
人高轉移肺癌細胞，095-D細胞
人肺鱗癌細胞，SK-MES-1細胞
人大細胞肺癌細胞，NCI-H661細胞
人肺黏液上皮樣癌細胞，NCI-H292細胞