菌種 傳代培養(yǎng)保藏法 : :  :tongpaibio   

定期移植法  亦稱(chēng)傳代培養(yǎng)保藏法，包括斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、液體培養(yǎng)等。是指將菌種接種于適宜的培養(yǎng)基中，zui適條件下培養(yǎng)，待生長(zhǎng)充分后，于4～6℃進(jìn)行保存并間隔一定時(shí)間進(jìn)行移植培養(yǎng)的菌種保藏方法。 

操作步驟如下:培養(yǎng)基制備 
器皿準(zhǔn)備,培養(yǎng)基制備過(guò)程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、試管、培養(yǎng)皿、燒杯、吸管等，經(jīng)洗滌、干燥、包裝、滅菌后使用。 

菌種 傳代培養(yǎng)保藏法 溶解培養(yǎng)基配料  先在燒杯中放適量水，按培養(yǎng)基配方稱(chēng)取各項(xiàng)材料，依次將緩沖化合物、主要元素、微量元素、維生素等材料加入水中溶解，zui后加足水量，攪拌均勻。 

調(diào)pH值  配料溶解后將培養(yǎng)基冷卻至室溫，根據(jù)要求加稀酸（0.1mol/L鹽酸）或稀堿(10%氫氧化鈉)調(diào)pH值。加酸或堿液時(shí)要緩慢、少量、多次攪拌，防止局部過(guò)堿或過(guò)酸而導(dǎo)致測(cè)量不準(zhǔn)確和營(yíng)養(yǎng)成分被破壞。

菌種 傳代培養(yǎng)保藏法 加凝固劑  配制固體培養(yǎng)基時(shí)需加凝固劑，如瓊脂、明膠等。將凝固劑加入液體培養(yǎng)基中，加熱并不斷攪拌至融解，再補(bǔ)足所蒸發(fā)水分。

過(guò)濾分裝  在二層紗布中間夾入脫脂棉，將配好的培養(yǎng)基趁熱過(guò)濾并分裝。斜面培養(yǎng)基分裝量約為試管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培養(yǎng)基分裝量以試管高度的二分之一為宜。分裝過(guò)程中勿使培養(yǎng)基沾污管口，以免弄濕棉塞造成污染。

瑞士假單胞菌    Pseudomonas reinekei
惡臭假單胞菌
嗜冷假單胞菌    Pseudomonas psychrophila
類(lèi)產(chǎn)堿假單胞菌    Pseudomonas pseudoalcaligenes
草假單胞菌
穿孔素假單胞菌    Pseudomonas pertucinogena
爛泥假單胞菌    Pseudomonas peli
孔雀尾假單胞菌    Pseudomonas pavonaceae
帕勒隆尼氏假單胞菌    Pseudomonas palleroniana
海綿假單胞菌    Pseudomonas pachastrellae
耳炎假單胞菌    Pseudomonas otitidis

包扎標(biāo)記:將試管加棉塞，外面包扎一層牛皮紙或鋁箔并注明培養(yǎng)基名稱(chēng)及配制日期。 
滅菌  根據(jù)要求將培養(yǎng)基滅菌，通常蒸汽滅菌為121℃，15～20min。
斜面擺放,滅菌后及時(shí)擺放斜面，斜面長(zhǎng)度不超過(guò)試管管長(zhǎng)的二分之一為宜。
無(wú)菌檢查 將滅菌的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作無(wú)菌檢驗(yàn)，通常30℃培養(yǎng)1～3天。無(wú)菌檢查合格后將其保存于4℃下備用。 

接種:斜面接種,點(diǎn)接 把菌種點(diǎn)接在斜面中部偏下方處。適用于擴(kuò)散型生長(zhǎng)及絨毛狀氣生菌絲類(lèi)霉菌（如毛霉、根霉等）。

中央劃線(xiàn):從斜面中央自下而上劃一直線(xiàn)。適用于細(xì)菌和酵母菌等。
稀波狀蜿蜒劃線(xiàn)法  從斜面底部自下而上劃“之"字形線(xiàn)。適用于易擴(kuò)散的細(xì)菌，也適用于部分真菌。
密波狀蜿蜒劃線(xiàn)法 從斜面底部自下而上劃密“之"字形線(xiàn)。能充分利用斜面獲得大量菌體細(xì)胞，適用于細(xì)菌和酵母菌等。
挖塊接種法  挖取菌絲體連同少量培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)接到新鮮斜面上。適用靈芝等擔(dān)子菌類(lèi)真菌。 

穿刺接種  用接種針從原菌種斜面上挑取少量菌體，從柱狀培養(yǎng)基中心自上而下刺入，直到接近管底（勿穿到管底），然后沿原穿刺途徑慢慢抽出接種針。適用于細(xì)菌和酵母菌等。 

液體接種:挑取少量固體斜面菌種或用無(wú)菌滴管等吸取原菌液接種于新鮮液體培養(yǎng)基中。

嗜一氧化碳假諾卡氏菌    Pseudonocardia carboxydivorans
食苯假諾卡氏菌    Pseudonocardia benzenivorans
自養(yǎng)假諾卡氏菌
橙色假諾卡氏菌    Pseudonocardia aurantiaca
不解糖假諾卡氏菌    Pseudonocardia asaccharolytica
氨氧化假諾卡氏菌    Pseudonocardia ammonioxydans
榿木假諾卡氏菌    Pseudonocardia alni
嗜丙氨酸假諾卡氏菌    Pseudonocardia alaniniphila
廈門(mén)假單胞菌    Pseudomonas xiamenensis
黃色海假單胞菌
淺綠黃假單胞菌    Pseudomonas viridiflava
斡氏假單胞菌    Pseudomonas veronii
溫哥華假單胞菌    Pseudomonas vancouverensis
陰城假單胞菌    Pseudomonas umsongensis
托木爾峰假單胞菌
平凡假單胞菌    Pseudomonas trivialis
山黃麻假單胞菌    Pseudomonas tremae
托拉斯假單胞菌    Pseudomonas tolaasii
賽維瓦爾假單胞菌    Pseudomonas thivervalensis
腐臭假單胞菌    Pseudomonas taetrolens
丁香假單胞菌
類(lèi)黃假單胞菌
施氏假單胞菌

秸稈色假單胞菌    Pseudomonas straminea

猴假單胞菌    Pseudomonas simiae
土壤假單胞菌
薩氏假單胞菌    Pseudomonas salomonii
食爬蟲(chóng)假單胞菌    Pseudomonas reptilivora

培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中，在適宜的條件下培養(yǎng)至細(xì)胞穩(wěn)定期或得到成熟孢子。細(xì)菌培養(yǎng)溫度一般為30～37℃，真菌培養(yǎng)溫度一般為25～28℃。

保藏:培養(yǎng)好的菌種于4～6℃保存，根據(jù)要求每3～6個(gè)月移植一次。某些菌種，如芽裂酵母，阿舒假囊酵母，棉病囊霉等，須1～3個(gè)月移植一次。 保藏濕度用相對(duì)濕度表示，通常為50%～70%.斜面菌種應(yīng)保藏相繼三代培養(yǎng)物以便對(duì)照，防止因意外和污染造成損失。