細胞 無菌操作
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無菌室的滅菌:
1.定期打掃無菌室:每周打掃一次,先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等,然后用3‰來蘇爾或者新潔爾滅或者0.5%過氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱(培養箱)滅菌:先用3‰新潔爾滅擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%過氧乙酸,再用紫外燈照射
3.實驗前滅菌:打開紫外燈、三氧殺菌機、空氣凈化器系統各20-30分鐘
4.實驗后滅菌:用75%酒精(3‰新潔爾滅)擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。
細胞 無菌操作 實驗人員的無菌準備:
1.肥皂洗手。
2.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋
3.用75%酒精棉球擦凈雙手。
無菌操作的演示:
1.凡是帶入超凈工作臺內的酒精、PBS、培養基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面
.靠近酒精燈火焰操作。
3.器皿使用前必須過火滅菌
4.繼續使用的器皿(如瓶蓋、滴管)要放在高處,使用時仍要過火。
5.各種操作要靠近酒精燈,動作要輕、準確,不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。
6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管,防止交叉污染。
細胞 無菌操作 器械的清洗和消毒
玻璃器械洗消:(1)新的玻璃器皿的洗消:
1.自來水刷洗,除去灰塵。
2.烘干、泡鹽酸:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀鹽酸中12小時以除去臟物、鉛、砷等物。
3.刷洗、烘干:12小時后立即用自來水沖洗,再用洗滌劑刷洗,自來水沖干凈后用烤箱烘干。
4.泡酸、清洗:用清潔液(重鉻酸鉀120g:濃硫酸200ml:蒸餾水1000ml)浸泡12小時,然后從酸缸內撈出器皿用自來水沖洗15次,zui后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次。
5.烘干、包裝:洗干凈后先烘干,然后用牛皮紙(油光紙)包裝。
6.高壓消毒:包裝好的器皿裝入高壓鍋內蓋好蓋子,打開開關和安全閥,當蒸氣成直線上升時,關閉安全閥,當指針指向15磅時,維持20-30分鐘。
7.高壓消毒后烘干
常用設備
準備室的設備:單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜(放置未消毒物品)、儲品規(放置消毒過的物品)、包裝臺。
配液室的設備:扭力天平和電子天平(稱量藥品)、PH計(測量培養用液PH值)、磁力攪拌器(配置溶液室攪拌溶液)。
培養室的設備:液氮罐、儲品柜(存放雜物)、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統、低溫冰箱(-80℃)、空調、二氧化碳缸瓶、邊臺(書寫實驗記錄)。必須放在無菌間的設備:離心機(收集細胞)、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱(孵育培養物)、水浴鍋、三氧消毒殺菌機、4℃冰箱(放置serum和培養用液)。