病原分離
(1)病料的采集:zui急性和急性病例可采集死亡禽只的肝、脾、心血;慢性病例一般采集局部病灶組織;對不新鮮或已被污染的樣品,可自骨髓中采取病料。采病料時用燒紅的刀片燒烙組織,而后用滅菌棉拭子或接種環(huán)通過燒烙表面插入組織或心血內(nèi)取樣。如果為活禽,可通過鼻孔擠出粘液,或?qū)⒚奘米硬迦氡橇阎腥印?br>(2)培養(yǎng)基制備:馬丁瓊脂培養(yǎng)基(本實(shí)驗中采用該培養(yǎng)基)、5%雞血清葡萄糖淀粉瓊脂、鮮血瓊脂培養(yǎng)基。
(3)動物接種:如果病料污染嚴(yán)重,則可將0.2mL碾碎的病料,經(jīng)皮下或腹腔內(nèi)接種家兔、小鼠或易感雞,接種動物在24h~48h內(nèi)死亡,可以從肝臟、心血中分離到巴氏桿菌。
(4)培養(yǎng):將病料接種于馬丁瓊脂培養(yǎng)基在35℃~37℃下培養(yǎng),經(jīng)18h~24h培養(yǎng)后菌落直徑為1mm~3mm,菌落呈散在、圓形,表面凸起呈奶滴狀。
病原分離 觀察家禽巴氏桿菌病的臨診表現(xiàn)和病理解剖變化 掌握禽巴氏桿菌病的微生物學(xué)診斷方法
實(shí)驗內(nèi)容或原理:根據(jù)典型癥狀和病變,以及在顯微鏡下檢查組織涂片發(fā)現(xiàn)的兩極染色的桿菌,可初步診斷本病。但確診應(yīng)依靠病原分離鑒定,鑒定原理為革蘭氏染色法。
需用的儀器或試劑等 :動物:雞、小白鼠
器材:外科鑷子、外科剪、滅菌紗布、載玻片、糖發(fā)酵管等。
藥品:草酸銨結(jié)晶紫、革蘭氏碘、碳酸復(fù)紅、瑞特氏染液、美藍(lán)染液、棉拭子、接種環(huán)、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、甘露醇、鼠李糖、戊醛糖、纖維二糖、綿子糖、菊糖、赤蘚糖、戊五醇、M—肌醇、水楊苷。胰蛋白酶、L-胱胺酸、瓊脂粉、酚紅。
實(shí)驗步驟
一、臨床癥狀和病理變化 癥狀
急性癥狀:描述 慢性癥狀:描述 病理變化:描述
二 、微生物學(xué)診斷
抹片的制備:用鑷子夾持病變組織肝或脾,然后以滅菌剪刀剪取小塊,夾出后將其新鮮切面在載玻片上壓印或涂抹成薄層;
若取血液,用滅菌剪刀剪開心臟進(jìn)行蘸取或剪取凝血塊,用新鮮切面在載玻片上壓印或涂抹成薄層。自然干燥。將干燥好的抹片,涂抹面向上,以其背面在酒精火焰上來回通過數(shù)次,略作加熱進(jìn)行固定。
革蘭氏染色法:固定好的抹片上滴加草酸銨結(jié)晶紫色液,染色2min→水洗+加革蘭氏碘溶液于抹片上媒染2min→水洗→加95%酒精于抹片上脫色1min→水洗→加稀釋碳酸復(fù)紅復(fù)染30s→水洗→吸干→鏡檢。巴氏桿菌為革蘭氏陰性球桿菌或短桿菌,單個或成對存在,常有莢膜。
其他染色法:甲醇固定,瑞特氏或美藍(lán)染色呈兩極濃染的菌體。