正常細胞和腫瘤細胞常規核型標本制備
一、微量全血培養
(一)原理
人體外周血中淋巴細胞是成熟的免疫細胞,正常情況下處于G。期不再增殖。PHA(Phytohemagglutinin,植物血凝素)是人和其它動物淋巴細胞的有絲分裂刺激劑,它能使處于G0期的淋巴細胞轉化為淋巴母細胞,進入細胞周期開始旺盛的有絲分裂。
人體微量全血培養是一種簡單的淋巴細胞培養方法。此法采血量少、操作簡便,在 PHA作用下進行短期培養即可獲豐富的、有絲分裂活躍的淋巴母細胞,適于制備核型標本。各種因素的效應(如病毒、電離輻射、化學藥劑等)也可在淋巴細胞的培養條件下進行觀察,從而進行多種在體內無法進行的研究。因此它是細胞生物學及其它學科研究中的一種有效的方法。
正常細胞和腫瘤細胞 (二)操作
1.打開超凈臺紫外燈20~30分鐘。洗手、換潔凈白大衣后進入操作室。啟動超凈臺,點燃煤氣燈。用75%酒精棉球擦洗手、各種試劑瓶及操作臺面,然后將培養液及肝素、秋水仙素、PHA等所需溶液移入超凈臺。
2.在超凈臺內將每個培養瓶裝入5ml培養液及0.2ml PHA溶液,封好備用。
3.用5ml注射器,7號針頭,先吸取少許肝素濕潤針筒,然后從肘靜脈抽血l~2ml。
每個培養瓶接種全血O.2ml左右輕輕搖動使血和培養液混勻。
4.在培養瓶上標記好供血者姓名、性別、采血日期等,放入培養箱中37℃培養。每天輕輕震蕩培養瓶二、三次,防止血球沉積并保證血細胞與培養液充分接觸,促進細胞生長繁殖。