細胞:AC29細胞
中文名稱:小鼠惡性間皮瘤細胞
生長特性:貼壁細胞
培養(yǎng)基:1640培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
熒光株:AC29-RFP熒光標記細胞株 AC29-GFP熒光標記細胞株 AC29-LUC熒光標記細胞株
耐藥株:AC29-DDP耐藥株 AC29-PTX耐藥株 AC29-ADM耐藥株
細胞檢測服務:AC29細胞種屬鑒定(細胞檢測技術服務可直接咨詢客服 )
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內皮抑素(endostatin)一種具有抑制血管生長的蛋白質.
休眠蛋白(restin)是內皮抑素的同源蛋白質,它來源于膠原蛋白XV的羧端非膠原蛋白結構域(NC1)。
為了研究鼠源休眠蛋白對內皮細胞生長的影響, 利用RT-PCR從鼠肌肉中擴增出它的基因, 克隆入原核表達載體pQE32。
誘導后, 重組蛋白質以包涵體形式高效表達, 表達量約占菌體總蛋白質的60%~70%。
重組蛋白質經純化復性后, 可以特異地抑制bFGF刺激的牛主動脈內皮細胞的增殖, 但是休眠蛋白的抑制活性比內皮抑素活性稍低.
流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn), 休眠蛋白可以引起內皮細胞的細胞周期的改變, 并且引起細胞凋亡。
貼壁細胞簽收操作:
1. 收到細胞后請盡快更換為含 15% 血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加 10% 的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過 72 小時)
2. 貼壁細胞收到后切忌立刻進行消化,將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育 6-8 小時或過夜再做消化傳代。
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或者凍存。