細胞:hTERT-HPNE細胞
中文名稱:人胰腺導管上皮細胞
生長特性:貼壁
培養基:1640培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
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哺乳動物細胞核的各個組成部分,都不是隨機排列的,它們的排列模式可以用統計學方法測量,這種發現有助于研究細胞的運作機制,對癌癥等疾病中,細胞核功能障礙進行解釋。
發現支配一種重要控制蛋白在細胞核內分布的空間相關性,與哺乳動物細胞核內其它成分相關。CBP蛋白分布廣泛,作用于細胞核內的特定基因,并控制這些基因在細胞周期的特定時間內表現。
利用熒光染劑對細胞核內的成分進行標記,以鑒定CBP濃縮區(concentrated pocket)。在顯微鏡下觀察到的,是一個非常復雜的模式。
接下來,對細胞核組成分中最近的鄰居之距離進行測量,研制出一種工具,可以針對核內可能與CPB有關的其它蛋白、基因域進行測定.
還研制出一種模型,可用來分析更易定位于CBP袋附近的成分,最后得到了由CPB濃縮定位驅動的細胞核組分定位的細胞核圖譜。
之所以選擇CPB,是因為CPB是一個研究相當透徹的基因調節劑,它可以改變作用基因的部分結構而啟動基因并表現特殊蛋白。
利用熒光染料和成熟的影像技術,發現CPB區更傾向于定位在其作用的基因域附近。