細胞:NCI-H820細胞
中文名稱:人乳頭狀肺腺癌細胞
生長特性:貼壁
培養基:1640培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)
H9亞型(AIV-H9)核酸擴增檢測
實驗目的:適用于檢測動物體液、咽或泄殖腔試子或肺臟、淋巴結等組織標本以及細胞培養液中病毒H9亞型RNA,適用于病毒感染的輔助診斷及流行病學調查,其檢測結果僅供參考。
實驗原理:選取一對H9亞型(AIV-H9)特異性引物和一條特異性熒光探針, 應用Trizol提取RNA,經逆轉錄酶作用將RNA轉錄成cDNA,后者在Taq酶作用下,配以FQ-Buffer(內含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體(dNTPs)等成分,通過一步PCR-熒光探針體外擴增法對病毒H9亞型RNA進行擴增,從而達到快速檢測之目的。
標本采集:
適用標本類型:發病動物體液、咽或泄殖腔試子或肺臟、淋巴結等組織標本;病毒細胞培養液。
組織:取發病動物肺、肝、脾、肺、腎、淋巴結及胰腺等組織約1g,置入1.5ml潔凈EP管,立即送檢。
體液及培養液體:取上述標本約1ml,置入1.5ml潔凈EP管,立即送檢。
咽及泄殖腔等試子:用棉試子取咽或泄殖腔分泌物,將試子放入盛有1.0ml PBS(或生理鹽水)的離心管中,立即送檢。
標本保存和運輸:上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃。但不能超過6個月,標本運送應采用0℃冰壺。