細胞:OCCM-30細胞
中文名稱:小鼠成牙骨質細胞
生長特性:貼壁
培養基:DMEM-H培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
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細胞有絲分裂是生命的一個關鍵過程。有絲分裂中的錯誤會造成不育和智障,也可能導致癌癥。
研究人員知道蛋白激酶在分裂中起重要作用,但是還不清楚這些酶如何促成細胞中的一些重要的變化從而使細胞發生分裂。
為了能更全面地了解細胞分裂,研究人員將系統地尋找所有分裂所需的基因,然后檢測它們的產物,以此研究有絲分裂激酶是如何調節這些蛋白的。
這個研究項目對理解這個生命最基礎的過程至關重要——一個細胞如何變成兩個細胞。我們將逐個抑制人類活細胞中的基因并測定抑制后細胞是否還能分裂,以此找到有絲分裂所需的基因。
為了達到這個目的,研究人員使用了“RNA干擾"的方法——利用小分子RNA靶向特定的與有絲分裂有關的基因并使其沉默。
大約有20,000個基因將被逐個抑制,研究人員用精密顯微鏡來拍下細胞分裂過程的動態畫面——研究人員將會拍下每組細胞在48小時內的變化情況,用于捕捉沉默特定基因的整個影響——預期需要記錄數以十萬計的動畫。