細胞:CMT-93細胞
中文名稱:小鼠結腸癌細胞
生長特性:貼壁
培養基:DMEM-H培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
CMT-93細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)
(AIV-U)核酸擴增檢測RNA提取
1):樣品處理:
固體組織:取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿或剪刀剪碎,加入500μl RNA提取液A(Trizol reagents),研磨或振蕩至勻漿狀,轉移到1.5ml的EP管中,室溫放置5min。
培養物、試子等液體標本:將標本充分混勻,取100μ液體標本加入500μl RNA提取液A(Trizol reagents)充分震蕩,室溫放置5min。
2):加入100μl氯仿,用力震蕩15s,室溫靜置5min, 4℃ 13,000rpm離心5min。
3):小心將上層水相轉移到干凈離心管中,加300 μl 無水乙醇,另加10μl RNA提取液B(內含不溶物,使用前室溫溶解并充分混勻),充分混勻,13,000rpm離心1min。
4):棄上清,加入500 μl 75%的DEPC乙醇,充分混勻,13,000rpm離心1min,小心吸去大部分乙醇。
5:將提取管敞口在室溫空氣中干燥5min待乙醇揮發干凈,用20μl DEPC H2O溶解沉淀。
陰性質控品:取100μl陰性質控品加入500μl RNA提取液A(Trizol reagents)充分震蕩,室溫放置5min。后按2-5操作。