細(xì)胞：FL62891細(xì)胞

中文名稱：人肝細(xì)胞

生長特性：貼壁

培養(yǎng)基：DMEM-H培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

FL62891細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動時（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項操作或者凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；）

基因分型(AIV)核酸擴(kuò)增檢測

實(shí)驗?zāi)康模河糜跈z測發(fā)病動物體液、咽或泄殖腔試子或肺臟、淋巴結(jié)等組織標(biāo)本以及細(xì)胞培養(yǎng)液中病毒RNA，適用于病毒(通用型、H5型、H7型和H9型)等感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測結(jié)果僅供參考。

實(shí)驗原理：用四對病毒(通用型、H5型、H7型和H9型)特異性引物，Trizol提取RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶作用將RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA，后者在Taq酶作用下，配以SD-Buffer(內(nèi)含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體(dNTPs)等成分，通過PCR-體外擴(kuò)增法對病毒RNA進(jìn)行擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳，溴化乙錠(EB)染色，紫外燈觀察，從而達(dá)到快速檢測之目的。

適用標(biāo)本類型：發(fā)病動物體液、咽或泄殖腔試子或肺臟、淋巴結(jié)等組織標(biāo)本；病毒細(xì)胞培養(yǎng)液。

組織標(biāo)本采集：取發(fā)病動物肺、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)及胰腺等組織約1g，置入1.5ml潔凈EP管，立即送檢。

體液及培養(yǎng)液體標(biāo)本采集：取上述標(biāo)本約1ml，置入1.5ml潔凈EP管，立即送檢。

咽及泄殖腔等試子標(biāo)本采集：用棉試子取咽或泄殖腔分泌物，將試子放入盛有1.0ml PBS(或生理鹽水)的離心管中，立即送檢。

保存和運(yùn)輸：上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過6個月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。