細(xì)胞：GC-2 spd細(xì)胞

中文名稱：小鼠精母細(xì)胞系

生長特性：貼壁

培養(yǎng)基：1640培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

GC-2 spd細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動時；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；）

胸膜肺炎放線桿菌(APP)核酸擴(kuò)增檢測：

實(shí)驗(yàn)儀器：主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛細(xì)管的儀器，MJ Opticon系列或取得資格認(rèn)證的定量PCR儀。

實(shí)驗(yàn)方法：

DNA提取 樣品處理

肺臟、淋巴結(jié)等固體組織：

取100mg左右組織標(biāo)本，加入1ml生理鹽水，用研磨器充分研磨，取50μl左右組織勻漿轉(zhuǎn)移到1.5mL的EP管中，加入50μl核酸提取液B(提取液內(nèi)含不溶物質(zhì)，使用前室溫解凍并充分混勻)，充分混勻。100℃處理10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液4μl做PCR反應(yīng)。

痰液、培養(yǎng)物、體液等液體標(biāo)本：

充分混勻標(biāo)本，取50μl液體標(biāo)本，加入加50μl核酸提取液B(提取液內(nèi)含不溶物質(zhì)，使用前室溫解凍并充分混勻)，充分混勻。100℃處理10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液4μl做PCR反應(yīng)。

陰性質(zhì)控品：取50 μl陰性質(zhì)控品加入50μl核酸提取液B，充分震蕩。后100℃裂解10分鐘，然后13,000rpm離心3分鐘，取上清液4μl做PCR反應(yīng)。

APP-陽性質(zhì)控品：直接取4μl進(jìn)行PCR擴(kuò)增?；虬凑誔CR擴(kuò)增介紹方法進(jìn)行定量分析。