細(xì)胞:H4IIE細(xì)胞
中文名稱:大鼠肝癌細(xì)胞
生長特性:貼壁
培養(yǎng)基:MEM培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
H4IIE細(xì)胞傳代:
1):細(xì)胞密度約80%時,吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意根據(jù)實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處,即可肉眼可見細(xì)胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續(xù)消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,把細(xì)胞層吹落,吹散。
3):取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4):注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項操作或者凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用,僅供參考,細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員,以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn),操作前,如果有不明白之處,先咨詢細(xì)胞庫管理員,避免不必要的損失;)
非洲豬瘟病毒(ASFV)核酸檢測結(jié)果分析判定:
反應(yīng)結(jié)束后保存檢測數(shù)據(jù)文件。根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)baseline的start值(3-8),stop值(13-18)以及Threshold值,使Std curve 窗口下的標(biāo)準(zhǔn)曲線達(dá)到最佳(correlation數(shù)值介于-0.97~-1之間,correlation數(shù)值等同于∣r∣值),最后到Reporter窗口下記錄儀器自動分析計算出的未知標(biāo)本數(shù)值(Qty-Copies/ml)。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】
陰性質(zhì)控品:全部陰性。
ASFV-陽性質(zhì)控品:陽性質(zhì)控品的 Ct 值均應(yīng)小于 35.0。
∣r∣≥0.97(correlation數(shù)值介于-0.97~-1之間,correlation數(shù)值等同于∣r∣值)。
以上條件應(yīng)同時滿足 ,否則,此次試驗視為無效,全部試驗應(yīng)重新進(jìn)行。
【結(jié)果判定】
測定結(jié)果的計算:
如果Ct值﹤38,則實驗樣品的ASFV DNA含量(基因拷貝數(shù)/ml)= Qty-Copies/ml;
如果38﹤Ct值﹤40,為灰區(qū)建議重新檢測,重新檢測若38﹤Ct值﹤40判為陽性,否則為陰性。
如果Ct值=40,則ASFV DNA含量(基因拷貝數(shù)/ml)﹤5×10P2PCopies/ml (低于檢測下限)。