細胞:HA1800細胞
中文名稱:人正常星形膠質細胞
生長特性:貼壁
培養基:1640 培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
收到細胞后請盡快更換配套培養基,或自己配置的新鮮培養基(含15%血清),如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)。
HA1800細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)
巴貝斯蟲(BBS)核酸檢測:
標本采集、保存與運輸
適用標本:疑似動物(牛)全血紅細胞。
標本采集:全血:無菌注射器抽取待檢者靜脈血2ml,置于Na2EDTA或枸櫞酸na抗凝管中,充分混勻,密閉送檢。
實驗標本保存:上述標本應立即送檢,標本運送請用冰壺。
實驗方法:
DNA提取:
全血標本預處理(按下述步驟操作,用戶也可用淋巴細胞分離液分離淋巴細胞)。
1:將抗凝血搖勻,取500μl轉至一潔凈的1.5ml 離心管中,編號標記。
2:加入1ml 1×紅細胞裂解液(RCLB,試劑盒配備10×RCLB,使用前請用雙蒸餾水按1:9比例配制成1×RCLB),劇烈震蕩30s,10,000g離心5min,棄上清。
3:重復 1.1.2 兩至三次至無明顯紅色沉淀。
4:加入1ml生理鹽水,劇烈震蕩15s,13,000g離心3min,棄上清。
陰性質控品:取50μl陰性質控品,加50μl核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘,13,000rpm離心3分鐘,取上清液4μl做PCR反應。
BBS陽性質控品:直接取4μl進行PCR擴增,或按照PCR擴增介紹方法進行定量分析。