細胞:SK-MEL-28細胞
中文名稱:人黑色素瘤細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:MEM+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
SK-MEL-28細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
收到細胞后請盡快更換配套培養基,或自己配置的新鮮培養基(含15%血清),如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)
古典豬瘟病毒(CSFV)核酸擴增檢測 標本采集及保存和運輸:
1)適用標本類型:豬血清、肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結等組織標本或病毒培養液等。
2)標本采集:
豬肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結等組織:采集可疑病死豬或捕殺病豬疑似組織約1g左右,置入1.5ml潔凈EP管,立即送檢。
血清: 用一次性無菌注射器抽取受檢豬耳靜脈或者前腔靜脈靜脈血2-5ml,靜置斜放待血清析出, 1,0000rpm離心3分鐘,可取上清立即用于測試;或吸取上部血清(約500µl)轉入無菌1.5ml Eppendoff管,立即送檢。
3)保存和運輸:上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃。但不能超過6個月,標本運送應采用0℃冰壺。
結果判斷:陰性質控品無帶出現(引物帶除外),CSFV陽性質控品出現142bp 擴增帶,若被檢樣品出現142bp 擴增帶為古典豬瘟病毒(CSFV)陽性,否則為陰性。
【質控標準】
陰性質控品:沒有目的條帶,全部陰性。
CSFV陽性質控品:出現目的條帶(142bp)。
以上兩個條件應該同時滿足,否則,此次試驗視為無效。