細胞：STO細胞
中文名稱：小鼠胚胎成纖維細胞
生長特性：貼壁細胞
培養基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）
凍存條件：50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
STO細胞傳代：
1）：細胞密度約80%時，吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據實際情況，把握消化時間）。
2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；
（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續消化）
直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。
3）：取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中，添加適當的培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養。
4）：注意培養基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
收到細胞后請盡快更換配套培養基，或自己配置的新鮮培養基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基，請在原瓶培養基中額外添加10%的血清（原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時）。
（網絡信息主針對網絡推廣作用，僅供參考，細胞培養請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）
古典豬瘟病毒(CSFV)核酸擴增檢測 （逆轉錄）
根據標本數取0.2ml DEPC 處理的PCR反應管，取出CSFV RT MIX室溫溶解，向反應管中每管加入7μl CSFV RT MIX，1μl逆轉錄酶系(使用前請10,000rpm瞬時離心30s)， 以及2μl 上述獲得的RNA。1,0000rpm瞬時離心30秒，將各反應管放入PCR儀器的反應槽內，在PCR儀上進行以下循環：42℃ 30分鐘后98℃5分鐘滅活逆轉錄酶。
古典豬瘟病毒(CSFV)核酸擴增檢測（PCR擴增）
取單管單份CSFV-PCR反應管，加入處理后的樣品(或陰性質控品、CSFV陽性質控品)3μl，10,000rpm瞬時離心30s。將各反應管做好標記，置入PCR反應槽內，設置反應體積(30μl)，按照下列條件擴增，
循環條件：94℃變性2min，93℃ 30s→58℃ 30s→72℃ 30s ，共35個循環。
古典豬瘟病毒(CSFV)核酸擴增檢測（電泳檢測）
4.1 2%瓊脂糖凝膠配制：稀釋50×TAE（或5×TBE）至1×TAE(取20ml50×TAE，加980 ml雙蒸水至1L)或者0.5×TBE(取100ml 5×TBE，加900 ml雙蒸水至1L)，稱4g瓊脂糖放于500mL 錐形瓶中，1×TAE 或1×TBE 200 ml，置入微波爐中加熱熔解(避免加熱沸騰溶液外溢)，再加入20μl 溴化乙錠(EB)充分混勻。在電泳槽內放好梳子，倒入瓊脂糖凝膠，待凝固后使用。
4.2 電泳檢測：直接取PCR 擴增產物15μl，用加樣槍點樣于瓊脂糖凝膠孔中，以5V/cm 電壓，1×TAE中電泳，紫外燈下觀察結果。
