細胞:KELLY細胞
中文名稱:人神經母細胞瘤細胞
生長特性:貼壁
培養基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
KELLY細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
收到細胞后請盡快更換配套培養基,或自己配置的新鮮培養基(含15%血清),如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)
膜蛋白對于光合作用、視覺等功能至關重要。它們還是細胞的看門人,能決定什么可能會通過細胞膜,也幫助從細胞膜外部輸入養料和將內部垃圾輸出。由于這些多重角色,它們構成了很大一部分的藥物靶點。雖然它們的功能很明確,但是關于它們如何折疊的信息卻遠遠落后于球狀蛋白質。
(人HO-8910細胞 來源:通派細胞庫 人卵巢癌細胞)(Eahy926細胞 來源:通派細胞庫 腸系膜下腔動脈血管內皮細胞)
使用原始的基因組信息,來預測氨基酸鏈將如何通過遵循阻力最小的途徑(取決于鏈上每個殘基相關的能量),折疊成為功能蛋白質。一個蛋白質越接近于其功能性“原始"狀態,它就會越穩定。開創性理論生動地將這種能量描繪成一個漏斗。
(兔VX2細胞 來源:通派細胞庫 兔肝癌細胞)(人QSG7701細胞 來源:通派細胞庫 人正常肝細胞)
為了檢測他們的計算機模型,研究將它們與X射線晶體學獲得的真實蛋白質結構進行比較。大量的結構對球狀折疊的蛋白質是可用的,這些蛋白漂浮在體內,執行生命的任務。
(人Hep2細胞 來源:通派細胞庫 人喉鱗癌細胞)(人KB細胞 來源:通派細胞庫 人口腔表皮樣癌細胞)
很難獲得跨膜蛋白的相似結構,因為要提取它們用于成像,同時又不會破壞它們,難度非常的大。研究利用一種去垢劑洗掉目的蛋白上的大多數膜,它在蛋白質周圍留下一個脂肪層,但是卻給出一種涂層,可使整個分子在后來形成晶格。
(人RPMI 4788細胞 來源:通派細胞庫 人大腸癌細胞)(人FL細胞 來源:通派細胞庫 人羊膜細胞)
聯想記憶、水介導的結構和能量模型(AWSEM),來解釋膜蛋白所的外界影響,包括將部分折疊蛋白質插入膜的易位子機制和膜本身。利用這種算法,成功確定熱力學漏斗在膜蛋白折疊中似乎仍然占據上風,如同它們為球狀蛋白質所做的。
(人WISH細胞 來源:通派細胞庫 人羊膜細胞)(人L-o2細胞 來源:通派細胞庫 人正常胚胎肝細胞)
了解在它們之間轉換的參數。這些參數兩個殘基(珠)應該相互作用的多么強烈,并考慮周圍的環境。這可讓我們能夠從原始序列做出預測。隨著越來越多的結構變得可用,研究希望調整AWSEM膜算法。
(人Chang Liver細胞 來源:通派細胞庫 人chang式肝細胞)(人HL-7702細胞 來源:通派細胞庫 人肝細胞)
這表明大部分的漏斗形折疊發生在蛋白質進入膜之后,很少是因為疏水性(動力學)相互作用,疏水性相互作用在球狀蛋白質折疊中發揮了更大的作用。根據原始的基因組序列,相當好地預測膜蛋白結構。這對于解釋新一代的實驗結果將非常的有用。