細(xì)胞：RBMEC細(xì)胞

中文名稱：大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁

RBMEC細(xì)胞培養(yǎng)基：DMEM-L +10% FBS （GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí)）。

RBMEC細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時(shí)，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見(jiàn)細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；）

鴨瘟病毒(DPV)核酸擴(kuò)增檢測(cè) 

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹坑糜跈z測(cè)疑似動(dòng)物(鴨、鵝等水禽)血清及組織(頭頸淋巴結(jié)等)病樣組織標(biāo)本以及細(xì)胞培養(yǎng)液中鴨瘟病毒(DPV)DNA，適用于鴨瘟病毒(DPV)感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【實(shí)驗(yàn)原理】用一對(duì)鴨瘟病毒(DPV)基因保守序列特異性引物和一條特異性熒光探針，經(jīng)堿裂解法提取DNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(內(nèi)含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，通過(guò)體外擴(kuò)增法對(duì)鴨瘟病毒(DPV)進(jìn)行擴(kuò)增，從而達(dá)到快速定量檢測(cè)之目的。

【實(shí)驗(yàn)組成】

（核酸提取液B 4管 500μl/管）（Taq 酶系  1管 80μl/管）（DPV-PCR MIX 1管 960μl/管）

（DPV陽(yáng)性質(zhì)控品 1管 50μl/管(1×107Copies/ml)）（陰性質(zhì)控品 1管 500μl/管）

結(jié)果分析判定：

反應(yīng)結(jié)束后保存檢測(cè)數(shù)據(jù)文件。根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)baseline的start值（3~8），stop值（13~18）以及Threshold值，使Std curve 窗口下的標(biāo)準(zhǔn)曲線達(dá)到最佳（correlation數(shù)值介于-0.97~-1之間，correlation數(shù)值等同于∣r∣值），最后到Reporter窗口下記錄儀器自動(dòng)分析計(jì)算出的未知標(biāo)本數(shù)值（Qty-Copies/ml）。

【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】

陰性質(zhì)控品：全部陰性。

DPV-陽(yáng)性質(zhì)控品：陽(yáng)性質(zhì)控品的 Ct 值均應(yīng)小于 35.0。

∣r∣≥0.97（correlation數(shù)值介于-0.97~-1之間，correlation數(shù)值等同于∣r∣值）。

 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足 ，否則，此次試驗(yàn)視為無(wú)效，全部試驗(yàn)應(yīng)重新進(jìn)行。