細胞:SK-N-AS細胞
中文名稱:人腦神經膠質母細胞瘤
生長特性:貼壁細胞
SK-N-AS細胞培養基:DMEM-H+20%FBS+1%NEAA(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
收到細胞后請盡快更換配套培養基,或自己配置的新鮮培養基(含15%血清),如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)。
SK-N-AS細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)
流行性乙型腦炎病毒(JEV)核酸擴增檢測
【實驗目的】檢測人(動物)腦脊液、淋巴結以及血清或病毒細胞培養液等標本中流行性乙型腦炎病毒(日本乙型腦炎病毒-JEV)RNA,適用于(JEV)感染的輔助診斷及流行病學調查,其檢測結果僅供參考。
【實驗原理】本試劑盒選取一對流行性乙型腦炎病毒(JEV)特異性引物和一條特異性熒光探針, 應用Trizol提取RNA,經逆轉錄酶作用將RNA轉錄成cDNA,后者在Taq酶作用下,配以FQ-Buffer(內含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體(dNTPs)等成分,用PCR-熒光探針體外擴增法對流行性乙型腦炎病毒(JEV)RNA進行體外擴增,從而達到快速檢測之目的。
【實驗組成】
(RNA提取液B、1管、v500μl/管)(JEV RT MIX、2管、140μl/管)(逆轉錄酶系、1管、40μl/管)
(Taq酶系、1管、80μl/管)(JEV-PCR MIX、1管、960μl/管)
(JEV陽性質控品、1管、50μl/管(107Copies/ml))(陰性質控品、1管、500μl/管)
(DEPC水、1管、2000μl/管)備注: RNA提取液A(Trizol Reagents)等另行配備。
【質控標準】
陰性質控品:全部陰性。沒有曲線增長。
JEV-陽性質控品:陽性質控品的 Ct 值均應小于 35.0。
∣r∣≥0.97(correlation數值介于-0.97~-1之間,correlation數值等同于∣r∣值)。
以上條件應同時滿足 ,否則,此次試驗視為無效,全部試驗應重新進行。