細(xì)胞:MEF細(xì)胞
中文名稱:小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
生長特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
MEF細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用,僅供參考,細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫管理員,以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn),操作前,如果有不明白之處,先咨詢細(xì)胞庫管理員,避免不必要的損失;)

SUMO化修飾與細(xì)胞的生物鐘
盡管已經(jīng)知道CLOCK是調(diào)控BMAL1磷酸化的,它同時(shí)還調(diào)控著BMAL1的SUMO化過程。但是BMAL1的SUMO化過程究竟有什么生物學(xué)功能?(通派細(xì)胞庫供應(yīng):PLC/PRF/5細(xì)胞)
與野生型BMAL1相比,突變的BMAL1(K259R)的量并不具有周期性的振蕩形式。另外,BMAL1(K259R)的量是野生型的兩倍,所以該蛋白的降解似乎有著非常重要的生物學(xué)功能。 (通派細(xì)胞庫供應(yīng):RKO細(xì)胞)
Bmal1-/-小鼠(Bmal1基因敲除)的胚胎成纖維細(xì)胞的E-box控制的基因的振蕩形式(Dbp)被改變了。BMAL1的病毒表達(dá)載體可以拯救該基因的周期性振蕩,(通派細(xì)胞庫供應(yīng):SW480細(xì)胞)但是如果是BMAL1(K259R),則產(chǎn)生了更短的Dbp節(jié)律性。
SUMO化在BMAL1的周期性表達(dá)和功能中具有重要作用,(通派細(xì)胞庫供應(yīng):SW598細(xì)胞)反映出了一個(gè)生物鐘調(diào)節(jié)的重要特征。今后的研究應(yīng)該側(cè)重于識(shí)別SUMO通路中的各個(gè)元素,因?yàn)樗鼈儺?dāng)中有些可能是選擇性為生物鐘調(diào)控服務(wù)的。