細(xì)胞:RH-35細(xì)胞
中文名稱:大鼠肝癌細(xì)胞
生長特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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干細(xì)胞是一類具有自我更新、高度增殖和多向分化潛能的細(xì)胞群體。根據(jù)個(gè)體發(fā)育過程中出現(xiàn)的先后次序,干細(xì)胞可分為胚胎干細(xì)胞(ESC)和成體干細(xì)胞(ASC)。
ESC具有發(fā)育的全能性,在一定條件下可以向內(nèi)、中、外三個(gè)胚層的細(xì)胞和組織分化,已可成功分離并建系,由于不同個(gè)體間的免疫屏障和倫理學(xué)問題存在廣泛爭議,其應(yīng)用仍停留在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段。
成體組織的ASC由于自身遺傳背景,避免了倫理問題和免疫屏障,同時(shí)來源豐富、容易獲得、體外誘導(dǎo)條件相對成熟,在血液病、心腦血管疾病、惡性腫瘤等疾病的治療和組織損傷修復(fù)方面有廣闊的應(yīng)用前景,已成為生命科學(xué)研究的一個(gè)新熱點(diǎn),本次會(huì)議有多個(gè)具有水平的專題報(bào)告介紹了這方面的研究成果。
在干細(xì)胞生物學(xué)研究中,人們發(fā)現(xiàn)某些成體組織細(xì)胞不但能再生,而且在一定條件下可跨系統(tǒng)、跨胚層分化成其他組織細(xì)胞,稱為ASC的可塑性,其機(jī)制尚未闡明,且存在廣泛爭議。
MAPC體外培養(yǎng)可分化形成大多數(shù)的臟壁中胚層、神經(jīng)外胚層和內(nèi)胚層細(xì)胞;移植給非照射的宿主,MAPC可植活并向造血系統(tǒng)、肝臟、肺和腸分化。MAPC體外擴(kuò)增能力強(qiáng),培養(yǎng)擴(kuò)增80代后仍可維持其細(xì)胞表型和多向分化潛能。