細(xì)胞:HCCC-9810細(xì)胞
中文名稱:人膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞
生長特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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通過觀察被PcG(Polycomb group)蛋白抑制轉(zhuǎn)錄的177個基因
研究人員發(fā)現(xiàn)足足有77個基因表現(xiàn)出與癌癥相關(guān)的DNA甲基化酶化改性。癌癥中胚胎干細(xì)胞Polycomb目標(biāo)基因有12倍的可能性被甲基化,這一發(fā)現(xiàn)非常重要。
研究人員在與乳腺癌、直腸癌、肺癌、子宮癌等對應(yīng)研究中發(fā)現(xiàn),胚胎干細(xì)胞中一些被Polycomb蛋白抑制的基因本質(zhì)上是提前標(biāo)記的,通過DNA甲基化改性變得沉默。
這種基因沉默阻礙胚胎干細(xì)胞分化,因此它們變成日后癌癥發(fā)展的‘禍種’。
該研究不僅提供了癌癥干細(xì)胞起源的實(shí)驗(yàn)證據(jù),它也支持了癌癥中實(shí)驗(yàn)胚胎學(xué)的早期引入。我們發(fā)現(xiàn)癌癥往往在經(jīng)過外成改變的細(xì)胞中發(fā)展……這說明在癌癥發(fā)展過程中外成事件在遺傳事件之前。
既然我們的研究表明癌癥植根于干細(xì)胞,那么它將對我們找出未發(fā)現(xiàn)的外成變異十分重要,從而使人們避免潛在的癌癥高危細(xì)胞。