禽霍亂（禽巴氏桿菌病）診斷技術 ATCC細胞
1．本次實驗的目的和要求
（1）觀察家禽巴氏桿菌病的臨診表現和病理解剖變化
（2）掌握禽巴氏桿菌病的微生物學診斷方法
2．實驗內容或原理
根據典型癥狀和病變，以及在顯微鏡下檢查組織涂片發現的兩極染色的桿菌，可初步診斷本病。但確診應依靠病原分離鑒定，病原分離鑒定原理為革蘭氏染色法。
禽霍亂（禽巴氏桿菌病）診斷技術 ATCC細胞3．需用的儀器或試劑等
動物：雞、小白鼠
器材：外科鑷子、外科剪、滅菌紗布、載玻片、糖發酵管等。
藥品：草酸銨結晶紫、革蘭氏碘、碳酸復紅、瑞特氏染液、美藍染液、棉拭子、接種環、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、甘露醇、鼠李糖、戊醛糖、纖維二糖、綿子糖、菊糖、赤蘚糖、戊五醇、M—肌醇、水楊苷。胰蛋白酶、L-胱胺酸、瓊脂粉、酚紅。
4．實驗步驟
一、臨床癥狀和病理變化
⒈ 癥狀
（1）急性癥狀:描述
（2）慢性癥狀:描述
⒉ 病理變化:描述
禽霍亂（禽巴氏桿菌病）診斷技術 ATCC細胞二 、微生物學診斷
⒈ 抹片的制備
用鑷子夾持病變組織肝或脾，然后以滅菌剪刀剪取小塊，夾出后將其新鮮切面在載玻片上壓印或涂抹成薄層；若取血液，用滅菌剪刀剪開心臟進行蘸取或剪取凝血塊，用新鮮切面在載玻片上壓印或涂抹成薄層。自然干燥。將干燥好的抹片，涂抹面向上，以其背面在酒精火焰上來回通過數次，略作加熱進行固定。
⒉ 革蘭氏染色法
固定好的抹片上滴加草酸銨結晶紫色液，染色2min→水洗+加革蘭氏碘溶液于抹片上媒染2min→水洗→加95％酒精于抹片上脫色1min→水洗→加稀釋碳酸復紅復染30s→水洗→吸干→鏡檢。巴氏桿菌為革蘭氏陰性球桿菌或短桿菌，單個或成對存在，常有莢膜。
⒊ 其他染色法
甲醇固定，瑞特氏或美藍染色呈兩極濃染的菌體。
⒋ 病原分離
（1）病料的采集：zui急性和急性病例可采集死亡禽只的肝、脾、心血；慢性病例一般采集局部病灶組織；對不新鮮或已被污染的樣品，可自骨髓中采取病料。采病料時用燒紅的刀片燒烙組織，而后用滅菌棉拭子或接種環通過燒烙表面插入組織或心血內取樣。如果為活禽，可通過鼻孔擠出粘液，或將棉拭子插入鼻裂中取樣。
（2）培養基制備：馬丁瓊脂培養基（本實驗中采用該培養基）、5％雞血清葡萄糖淀粉瓊脂、鮮血瓊脂培養基。
（3）動物接種：如果病料污染嚴重，則可將0.2mL碾碎的病料，經皮下或腹腔內接種家兔、小鼠或易感雞，接種動物在24h～48h內死亡，可以從肝臟、心血中分離到巴氏桿菌。
（4）培養：將病料接種于馬丁瓊脂培養基在35℃～37℃下培養，經18h～24h培養后菌落直徑為1mm～3mm，菌落呈散在、圓形，表面凸起呈奶滴狀。
