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胚胎成纖維細胞

成纖維細胞 培養細胞觀察

時間:2014/2/18閱讀:1504
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成纖維細胞 培養細胞觀察

細胞接種或傳代以后,實驗者每天或至多間隔1~2d,要對細胞做常規性檢查。觀察細胞形態和生長情況以及培養的pH變化、有無污染等。根據細胞動態變化,做換液或傳代處理,如發現異常情況應及時采取措施。

1. 細胞形態 生長狀態良好的細胞,在一般顯微鏡下觀察時可見,細胞透明度大、折光性強、輪廓不清。細胞生長不良時,輪廓增強,胞質中常出現空泡、脂滴和其他顆粒狀物,細胞之間空隙加大,細胞形態可變得不規則甚至失去原有特點,如上皮細胞變成類上皮細胞等。某些染料當細胞死亡時能透過變性的胞膜與解體的細胞核DNA結合,而令其著色。因而常用臺盼藍(trypan blue) 鑒別細胞死活,活細胞不著色,死細胞核呈藍色。通派(上海)細胞庫:www.shtpbio.com

2. 細胞生長 初代培養或傳代的細胞懸液接種以后,經過長短不同的潛伏期后開始增殖。傳代細胞系、胚胎組織或幼體組織一般在第二天即可見細胞生長,一周內便可連接成片。接種細胞長滿瓶壁后,應及時做再培養。否則由于營養物消耗和代謝積累,細胞即進入停止期或退化期。此時細胞輪廓增強,細胞內常出現顆粒狀堆積物,為膨脹的線粒體,細胞質呈空泡化,細胞變圓、粗糙,嚴重時細胞從瓶壁脫落,只有及時再做傳代處理,才能使細胞繼續生長繁殖。

3. 營養液 正常情況下,培養液呈桃紅色。如果細胞維持在pH6.5~6.6條件下,細胞會脫落死亡。當培養液酸化變黃時,說明培養液中代謝產物已堆積到一定量,需要更換新鮮培養液。培養液中如加Hepes或用5%CO2溫箱培養可使pH維持相對穩定。更換營養液的時間,可依營養物的消耗而定,細胞生長旺盛時2~3d換一次,生長緩慢時,3~4d亦可。要特別注意各種細胞對pH值要求是不一樣的。

4. 微生物污染 微生物污染培養細胞培養物后會出現pH值改變,培養液呈現混濁狀。細菌感染后,由于細菌的運動,光鏡觀察可見有微閃光;真菌感染則在鏡下見許多細絲狀菌絲,有時還密集有群集孢子;支原體的污染需要借助一些檢測手段才可檢出。細胞污染以后一般應當廢棄,對于重要的細胞株,可以參考相關專著,介紹采取一些措施清除污染。比較重要的實驗、珍貴的細胞,至少由兩個實驗人員獨立培養操作,或由一個人分次(不同時)操作。除培養實驗室的衛生條件外,空氣中的濕度與微生物污染關系密切。重要的、周期長的實驗盡量安排在空氣濕度低的秋冬季進行。

成纖維細胞 培養細胞觀察
人胚肺成纖維細胞MRC-5    細胞株 來源 
人胚肺成纖維細胞CCC-HPF-1  細胞株 來源
人胚胎氣管組織來源細胞CCC-HBE-2  細胞株 來源
人胚胎肺成纖維細胞WI-38  細胞株 來源
SV-40Z轉化肺成纖維細胞WI38/VA13  細胞株 來源
人胚肺二倍體細胞2BS  細胞株 來源
人胚肺二倍體細胞KMB-17  細胞株 來源
人肺細胞HLF-a  細胞株 來源
人小細胞肺癌細胞DMS 153  細胞株 來源
人胚肺細胞 VA13細胞WI-38 VA13亞系 2RA  細胞株 來源
人胚肺二倍體細胞HEL-1  細胞株 來源
人胚肺細胞系KuMA  細胞株 來源
人肺轉化細胞系AE1201    細胞株 來源
人肺鱗癌細胞NCI-H226  細胞株 來源
人胚肺二倍體細胞HEL-2  細胞株 來源
人支氣管上皮樣細胞BEAS-2B  細胞株 來源
人胚肺轉化細胞SL-1  細胞株 來源
人肺腺癌細胞Calu-3  細胞株 來源

成纖維細胞 培養細胞觀察
體內細胞培養及其操作步驟

 

1. 瘤細胞懸液接種
(1)無菌選取生長良好(有光澤,淡紅色)瘤組織或對數生長期培養瘤細胞。   
(2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨,經80~100目篩網過濾成細胞懸液。
(3)培養細胞應用PBS洗兩遍。
(4)計數并調整細胞濃度至107~108/ml。
(5)常規消毒后,于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(0.1ml/部位,>106細胞)。初次接種成功率低,細胞數盡可能多一些。
(6)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期,以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短,zui后固定為一個相對穩定的時間。
2. 腹水瘤的建立與腹水瘤的接種 將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位,引起腹水,腹水中含有瘤細胞,將這種腹水反復傳代,即可成為腹水瘤。初次傳代時,腹水常呈血性(含大量紅細胞),反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。
(1)將凍存或培養的腹水瘤細胞離心和洗滌,進行細胞計數。
(2)消毒動物,左下腹穿刺接種106腹水瘤細胞。
(3)接種腹水瘤細胞后約7~12d,待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,用9號針頭抽取腹水,也可行腹部解剖后,用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。
(4)抽取的腹水經3000rpm離心15min,收集上清,分裝凍存備用。


人小細胞肺癌細胞NCI-H209  細胞株 來源
人低分化肺腺癌細胞GLC-82  細胞株 來源
人小細胞肺癌細胞NCI-H446  細胞株 來源
人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H157  細胞株 來源
人肺鱗癌細胞NCI-H520  細胞株 來源
人肺巨細胞癌高轉移細胞株PG-BE1  細胞株 來源
人肺巨細胞癌低轉移細胞株PG-LH7  細胞株 來源
人肺癌細胞A-427  細胞株 來源
人低分化肺腺癌細胞SK-LU-1  細胞株 來源
人肺支氣管癌細胞NCI-H1650  細胞株 來源
人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H1975  細胞株 來源
人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H2087  細胞株 來源
人小細胞肺癌細胞NCI-H2227  細胞株 來源
人非小細胞肺癌細胞NCI-H23  細胞株 來源
人肺腺鱗癌細胞NCI-H596  細胞株 來源
人非小細胞肺癌細胞NCI-H838  細胞株 來源
人肺鱗癌細胞LTEP-s  細胞株 來源


人原鈣黏素1(PCDH1)ELISA 試劑盒   免費待測 96T *
人白介素2受體(IL-2R)ELISA 試劑盒   免費待 96T  *
人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)ELISA 試劑盒   免費待測 96T *
人胸腎表達趨化因子(BRAK/CXCL14)ELISA 試劑盒   免費待測 96T *
人B-淋巴細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA 試劑盒   免費待測96T*
人結締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA 試劑盒   免費待測 96T *
人巨噬細胞集落刺激因子受體(M-CSFR)ELISA 試劑盒   免費待測 96T *
人免疫球蛋白A Fc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA 試劑盒   免費待測 96T*
人免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA 試劑盒   免費待測96T *
人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA 試劑盒   免費待測 96T *
人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA 試劑盒   免費待測 96T *
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人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA 試劑盒    免費待測 96T *
人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA 試劑盒    免費待測 96T *
人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA 試劑盒    免費待測96T*
人粒細胞趨化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA 試劑盒   免費待測 96T *
人ω干擾素(IFN-ω)ELISA 試劑盒   免費待測 96T*
人糖基化依賴的細胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA試劑盒   免費待測 96T*
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人肺部活化調節趨化因子(PARC/CCL18)ELISA試劑盒   免費待測 96T *
人黏膜地址素細胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA 試劑盒   免費待測 96T *
人β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA 試劑盒   免費待測 96T*
人可溶性CD38(sCD38)ELISA 試劑盒   免費待測 96T *
人可溶性CD21(CR2/sCD21)ELISA 試劑盒   免費待測 96T*
人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒   免費待測 96T *
人Toll樣受體9(TLR-9/CD289)ELISA試劑盒   免費待測 96T*
人轉化生長因子β2(TGFβ2)ELISA 試劑盒    免費待測96T *

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