人胚肺成纖維細胞 MRC-5細胞株
一、實驗目的 了解和掌握動物染色體涂片標本的制作過程。
二、實驗原理
三、實驗材料 青蛙或蟾蜍
四、實驗器具和藥品試劑 冰箱、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、分析天平、藥物天平、臺稱、試管架、離心管、吸管、燒杯、量筒、注射器(1ml、5ml)、5號針頭、載玻片、解剖盤、解剖刀、剪刀、鑷子、酒精燈、切片盒、切片架、紗布、黑白膠卷。 0.1％秋水仙素溶液、0.046M KCL 溶液、1％檸檬酸鈉溶液、甲醇、冰醋酸、磷酸緩沖液、Giemsa原液、沖洗底片的藥液。
五、實驗方法和步驟
(一) 前處理 用臺稱稱量青蛙或蟾蜍的體重，然后按10微克／克動物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時后，將動物處死，用剪刀剪開皮膚和肌肉，取出大腿骨和脛骨，剔凈股骨上的肌肉，然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨，用注射器（內裝5ml 1％ 檸檬酸鈉溶液）緩慢沖洗骨髓細胞到離心管中，經平衡后離心8分鐘，速度為1000轉／分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液，留沉淀物0.2ml，加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度，用吸管沖勻沉淀物，在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長一點時間。
(四) 固定 低滲后，以每分鐘1000轉速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液，留0.2ml沉淀物，沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復固定1～2次，離心的速度與時間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加4滴新配的固定液，沖勻沉淀物。從冰箱取出預先冷凍的載片，每片滴3滴細胞懸液，立即用嘴向載片上吹氣，使細胞均勻分散，在酒精燈火焰上來回烤一下，以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10：1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH＝6.8磷酸緩沖液稀釋)，然后用水沖洗，片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相，轉至高倍鏡詳細觀察兩棲類染色體的數目，屬于大、中、小染色體各有多少條。
人胚肺成纖維細胞 MRC-5細胞株 細胞索引：
人胚肺成纖維細胞MRC-5
人胚肺成纖維細胞CCC-HPF-1
人胚胎氣管組織來源細胞CCC-HBE-2
人胚胎肺成纖維細胞WI-38
SV-40Z轉化肺成纖維細胞WI38/VA13
人胚肺二倍體細胞2BS
人胚肺二倍體細胞KMB-17
人肺細胞HLF-a
人小細胞肺癌細胞DMS 153
人胚肺細胞 VA13細胞WI-38 VA13亞系 2RA
人胚肺二倍體細胞HEL-1
人胚肺細胞系KuMA
人肺轉化細胞系AE1201
人肺鱗癌細胞NCI-H226
人胚肺二倍體細胞HEL-2
人支氣管上皮樣細胞BEAS-2B
人胚肺轉化細胞SL-1
人肺腺癌細胞Calu-3
人小細胞肺癌細胞NCI-H209
人低分化肺腺癌細胞GLC-82
人小細胞肺癌細胞NCI-H446
人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H157
人肺鱗癌細胞NCI-H520
人肺巨細胞癌高轉移細胞株PG-BE1
人肺巨細胞癌低轉移細胞株PG-LH7
人肺癌細胞A-427
人低分化肺腺癌細胞SK-LU-1
人肺支氣管癌細胞NCI-H1650
人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H1975
人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H2087
人小細胞肺癌細胞NCI-H2227
人非小細胞肺癌細胞NCI-H23
人肺腺鱗癌細胞NCI-H596
人非小細胞肺癌細胞NCI-H838
人肺鱗癌細胞LTEP-s
人小細胞肺癌細胞LTEP-sm
人肺鱗癌瘤株LTEP-s
人肺鱗癌細胞NCI-H1703
人肺鱗癌細胞NCI-H2170
人非小細胞肺癌細胞NCI-H524
人肺腺癌細胞SPC-A1
人肺癌細胞A549
人非小細胞肺癌細胞H125
人肺癌細胞H1299
人肺癌細胞TKB-1
人肺腺癌細胞LTEP-a-2
人肺腺癌細胞Lu-165
人大細胞肺癌細胞NCI-H460
人肺腺癌細胞SPC-A-1
人高轉移肺癌細胞095-D
人肺鱗癌細胞SK-MES-1
人大細胞肺癌細胞NCI-H661
人肺黏液上皮樣癌細胞NCI-H292
人肺退行性癌細胞Calu-6
人肺腺癌細胞NCI-H1395
人非小細胞肺癌細胞NCI-H358
人非小細胞肺癌細胞HCC827
人典型小細胞肺癌細胞NCI-H1688
人胚肺成纖維細胞 MRC-5細胞株
一、實驗目的
通過實驗，掌握空氣干燥法制片技術。
二、實驗原理
在骨髓細胞中，有絲分裂的指數是相當高的，因此可以直接得到中期細胞而不必像血淋巴細胞那樣要經過體外培養。通過骨髓得到染色體是比較簡便的，一般也無需無菌操作。在臨床上多用于白血病的研究，在實驗條件下，這種染色體是機體內真實情況的反映，而且用骨髓制片的方法易于觀察毒性物質在體內對細胞和染色體的影響。
直接制片法，是直接從骨髓中取出細胞，經壓片法或空氣干燥法制片。所謂空氣干燥法，實際上是將細胞經過秋水仙素處理 ─ 低滲處理 ─ 充分的固定─ 滴片等步驟之后在載玻片上得到染色體制片的技術。有時，有人把滴片的步驟叫做染色體分散，也有人把這一步和隨后的干燥稱為空氣干燥法。“空氣干燥”就是滴片后，不加熱或任何處理，使載片在室溫下自然干燥的方法。空氣干燥法是一個十分有用的基本技術，要熟練掌握。
三、實驗材料
小白鼠
四、實驗器具和藥品試劑
冰箱、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、分析天平、藥物天平、試管架、離心管、吸管、燒杯、量筒、注射器(1ml、5ml)、5號針頭、載玻片、解剖盤、解剖刀、剪刀、鑷子、酒精燈、切片盒、切片架、紗布。
秋水仙素、檸檬酸鈉、氯化鉀、冰醋酸、甲醇、磷酸緩沖液、Giemsa、甘油、
硫酸、重鉻酸鉀。
五、實驗方法和步驟
(一) 秋水仙素處理 取骨髓前3～4小時先給小白鼠經腹腔注入0. 1％的
秋水仙素，注射劑量為4毫克／每公斤動物體重。
(二) 取骨髓 經秋水仙素處理的小白鼠，可用損傷脊髓法處死，然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉，取出大腿骨和脛骨，用一小塊紗布來回搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關節頭，然后將股骨剪碎投入小燒杯中，用2毫升1％檸檬酸鈉溶液攪爛碎骨，使骨髓細胞游離出來。靜止片刻，用吸管把懸浮液吸到離心管中，可重復沖洗一次。此時離心管中的細胞懸浮液可達 4～5毫升。
(三) 低滲 將所獲得的細胞懸浮液先進行平衡(注意：每次離心前都要平衡)，然后以 1000rpm離心10分鐘，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加0.075M KCL 溶液至8 毫升刻度，將細胞沉淀物吹散打勻，在水浴37℃ 低滲20～30分鐘。
(四) 固定 低滲處理后的材料，以1000rpm離心10分鐘，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，用吸管吹散沉淀物，沿管壁加固定液至6毫升, 沖勻后靜止固定20分鐘，即*次固定。按上述條件離心，去上清液，再次加入固定液至6ml，進行第二次固定。20分鐘后離心吸去上清液，留0.2ml沉淀物,再往沉淀物中滴加4滴固定液，沖勻制成細胞懸液。
(五) 滴片 取事先在冰箱中預冷的載玻片(載玻片須經硫酸洗液浸泡10天以上，經清水沖洗，用蒸餾水浸泡)，滴2～3滴細胞懸液于粘有冰水的載玻片上，用嘴吹氣，使細胞迅速分散。將載片插放在切片架上晾干。
(六) 染色 取2張制片平放在玻璃板上，用10：1 Giemsa染液染色20分鐘，流水沖洗后晾干即可鏡檢。
(七) 觀察 用中倍鏡選擇分散適度，不重迭的染色體分裂相，轉高倍鏡詳細觀察小白鼠染色體的形態特征，并計算2n的染色體數目。
