人包皮成纖維細(xì)胞 HFF細(xì)胞 細(xì)胞傳代培養(yǎng)(消化法)
具體操作:
一. 傳代前準(zhǔn)備:
1.預(yù)熱培養(yǎng)用液:把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。
2.用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺(tái)和雙手。
3.正確擺放使用的器械:保證足夠的操作空間,不僅便于操作而且可減少污染。
4.點(diǎn)燃酒精燈:注意火焰不能太小。
5.準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶,放入微波爐內(nèi)高火,8分鐘再次消毒。
6.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液:取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺(tái)內(nèi)。
7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞:注意取出細(xì)胞時(shí)要旋緊瓶蓋,人包皮成纖維細(xì)胞 HFF細(xì)胞 用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺(tái)面,再在鏡下觀察細(xì)胞。
8.打開瓶口:將各瓶口一一打開,同時(shí)要在酒精燈上燒口消毒。
細(xì)胞庫常用細(xì)胞:
人包皮成纖維細(xì)胞HFF
人羊膜細(xì)胞WISH
人羊膜細(xì)胞HA
人胚胎干細(xì)胞E1C4
人羊膜細(xì)胞HAN
人宮頸癌細(xì)胞HeLa
人卵巢畸胎瘤細(xì)胞PA-1
人卵巢腺癌細(xì)胞SK-OV-3
人宮頸癌細(xì)胞Ca Ski
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞HEC-1-B
人胎盤絨膜癌細(xì)胞BeWo
人宮頸癌細(xì)胞C-33A
人胚胎干細(xì)胞E1C2
人宮頸癌細(xì)胞Hela P10s-11F
人宮頸癌細(xì)胞Hela S3
人子宮頸癌細(xì)胞(GFP基因修飾)HeLa-GFP
人卵巢癌細(xì)胞Caov-3
人宮頸癌細(xì)胞H1HeLa
二.胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出舊培養(yǎng)液,用PBS清洗(沖洗),人包皮成纖維細(xì)胞 HFF細(xì)胞 加入適量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以蓋住細(xì)胞,*消化溫度是37℃。
2. 顯微鏡下觀察細(xì)胞:倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞,若胞質(zhì)回縮,細(xì)胞之間不再連接成片,表明此時(shí)細(xì)胞消化適度。
3.吸棄消化液加入培養(yǎng)液:棄去胰蛋白酶液,注意更換吸管,加入新鮮的培養(yǎng)液。
人卵巢癌細(xì)胞A2780
人宮頸癌細(xì)胞Hela 229
人卵巢癌細(xì)胞HO-8910
人子宮鱗癌細(xì)胞(高分化)HCC-94
人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞ES-2
人子宮頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞SiHa
人胚胎干細(xì)胞Endeavour-1
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞HEC-1-A
人胎盤絨毛癌細(xì)胞JAR
人卵巢癌細(xì)胞COC1
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞RL95-2
人卵巢腺癌細(xì)胞OVCAR-3
人胚胎干細(xì)胞HES 3.3
三.吹打分散細(xì)胞:
1.吹打制懸:用滴管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液。
2.吸細(xì)胞懸液入離心管:將細(xì)胞懸液吸入10ml離心管中。
3.平衡離心:平衡后將離心管放入臺(tái)式離心機(jī)中,以1000轉(zhuǎn)/分鐘離心6-8分鐘。
4.棄上清液,加入新培養(yǎng)液:棄去上清液,加入2ml培養(yǎng)液,用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。
人胚胎干細(xì)胞SH.hEXl(46.xx)
人胚胎干細(xì)胞HES 3.2
人胚胎干細(xì)胞HES 3.1
人胚胎干細(xì)胞E1C1
人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞HFSF
人胚胎眼 Tenon's囊成纖維細(xì)胞HFTF
人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤WERI-Rb-1
人鼻咽癌細(xì)胞CNE
人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27
人喉癌上皮細(xì)胞Hep-2
人舌鱗癌細(xì)胞Tca-8113
四.分裝稀釋細(xì)胞:
1.分裝:將細(xì)胞懸液吸出分裝至2-3個(gè)培養(yǎng)瓶中,加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。
2.顯微鏡下觀察細(xì)胞:倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量,必要是計(jì)數(shù)。注意密度過小會(huì)影響傳代細(xì)胞的生長,傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5×105/ml。zui后要做好標(biāo)記。
人咽鱗癌細(xì)胞FaDu
人舌鱗癌細(xì)胞Tca8113-P60
人口腔表皮樣癌細(xì)胞KB
人鼻咽癌細(xì)胞CNE-2Z
KM9304 EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞(彝族)
人淋巴細(xì)胞1301
人類粒細(xì)胞系Human Cell line 1D3
人永生化淋巴細(xì)胞CNLMG-B5537LC
人類成纖維細(xì)胞CNLMG-B5537SKIN
人 EB病毒轉(zhuǎn)化的 B細(xì)胞CGM1
人類淋巴母細(xì)胞瘤細(xì)胞HLCL 14C1
人早幼粒急性白血病細(xì)胞HL-60
人慢性髓系白血病細(xì)胞K562
人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞MOLT-4
人 Burkitt淋巴瘤細(xì)胞Raji
人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞Ramos
人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞THP-1
人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞U937
人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞Jurkat, Clone E6-1
人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞株M-07e
人紅系白血病細(xì)胞TF-1
人原巨核細(xì)胞型白血病細(xì)胞UT-7
人 Burkkit淋巴瘤細(xì)胞Daudi
人T淋巴瘤細(xì)胞(Tet-on基因修飾)Jurkat D,E
人T淋巴瘤細(xì)胞 Jurkat亞系Jurkat77
人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞TALL-104
人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞HuT 78
人急性T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞I 2.1
人伯基特淋巴瘤細(xì)胞EB-3
人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞Jurkat
人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞JurkatE6-1
IL-2依賴的人淋巴 T細(xì)胞系Kit225
人T細(xì)胞白血病細(xì)胞C8166
人急性骨髓白血病細(xì)胞KG-1a