人宮頸癌細胞C-33A細胞 培養的一般過程
一、準備工作 準備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備
工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與
消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他
儀器的檢查與調試。
二、取材 在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消
化分散細胞、分離等）后接入培養器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取
材這一過程。機體取出的組織細胞的培養稱為原代培養。
理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用于培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組
織）比成年個體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容易培養，腫瘤組織比正常組
織容易培養。取材后應立即處理，盡快培養，因故不能馬上培養時，可將組織塊切成黃豆般大
的小塊，置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物
質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。
三、培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養，則直
接將組織塊接入培養器皿底部，幾個小時后組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培
養，一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接
入培養器皿并直接加入培養基。細胞進入培養器皿后，立即放入培養箱中，使細胞盡早進入生
長狀態。

人宮頸癌細胞C-33A細胞 培養的一般過程  細胞凍存
配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中、離心1000rpm，5min；去除胰蛋白酶及舊的培養液，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的zui終密度為5×106/ml～1×107/ml；將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/ min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。

人宮頸癌細胞C-33A細胞 培養的一般過程  細胞復蘇

 1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。
      2. 從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養液，混勻；
      3. 離心， 1000rpm，5min；
      4. 棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養；
      5. 次日更換一次培養液，繼續培養。

 注意事項

 1．從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養細胞都可以用于凍存，但為對數生長期細胞。在凍存前一天換一次培養液；
      2．將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷；
      3．凍存和復蘇用新配制的培養液。

細胞：

人包皮成纖維細胞HFF  
人羊膜細胞WISH  
人羊膜細胞HA  
人胚胎干細胞E1C4  
人羊膜細胞HAN  
人宮頸癌細胞HeLa  
人卵巢畸胎瘤細胞PA-1  
人卵巢腺癌細胞SK-OV-3  
人宮頸癌細胞Ca Ski  
人子宮內膜腺癌細胞HEC-1-B  
人胎盤絨膜癌細胞BeWo  
人宮頸癌細胞C-33A  
人胚胎干細胞E1C2  
人宮頸癌細胞Hela P10s-11F  
人宮頸癌細胞Hela S3  
人子宮頸癌細胞（GFP基因修飾）HeLa-GFP  
人卵巢癌細胞Caov-3  
人宮頸癌細胞H1HeLa  
人卵巢癌細胞A2780  
人宮頸癌細胞Hela 229  
人卵巢癌細胞HO-8910  
人子宮鱗癌細胞（高分化）HCC-94  
人卵巢透明細胞癌細胞ES-2  
人子宮頸鱗狀細胞癌細胞SiHa  
人胚胎干細胞Endeavour-1  
人子宮內膜腺癌細胞HEC-1-A  
人胎盤絨毛癌細胞JAR  
人卵巢癌細胞COC1  
人子宮內膜腺癌細胞RL95-2  
人卵巢腺癌細胞OVCAR-3  
人胚胎干細胞HES 3.3  
人胚胎干細胞SH.hEXl(46.xx)  
人胚胎干細胞HES 3.2  
人胚胎干細胞HES 3.1  
人胚胎干細胞E1C1