L929細胞的轉染技術 ：

L929是小鼠成纖維細胞瘤細胞株，經常被用來檢測TNF-alpha及TNF-beta。對TNF的處理經常會引發細胞凋亡及死亡，因此L929細胞經常被用作免疫分析。但是，轉染L929細胞非常難，尤其使用基于脂質體技術的轉染試劑，我們使用GenJet VerⅡ及PolyJet轉染L929細胞獲得了75%的轉染效率，簡單的實驗步驟如下。

1、轉染時確保L929細胞達到80%的融合度，細胞必須健康并且傳代不能超過9代。

2、對于6孔板，用不含血清的DMEM分別稀釋1.0μg，DNA及3.0μl，Genjet VerⅡ或PolyJet轉染試劑。將稀釋好的轉染試劑加入DNA中，室溫下放置15分鐘以形成轉染復合物，其它規格的細胞培養器皿，可以根據表面積適當調整DNA含量。

3、將轉染復合物直接加入L929細胞中；6孔板，L929細胞的轉染技術 每孔含1.0ml培養基，在血清/抗生素存在下,轉染進行。

4、轉染后的24~48小時，監測轉染基因的表達情況。

Brief procedures for transfecting L929 cell.
L929 is a murine aneuploid fibrosarcoma cell line which isoften used to assay TNF-alpha and TNF-beta. Treatment with TNF initiatesapoptosis and subsequent cell death, therefore L929 cell is often used forimmunological assays. However L929 cell is hard to transfect, especiallyresistant to liposome based transfection method. We have been using GenJet Ver.II and PolyJet to transfect L929 cell and got up to 75% efficiency. The briefprocedures are described below for transfecting L929 cells with GenJet andPolyJet.
1. Grow L929 cell to ~80% confluency at the day of transfection. L929 cell mustbe healthy and less than 9 passages for maximum efficiency.
2. For 6-well plate, dilute 1.0 μgof DNA and 3.0 μl of GenJet Ver.II or PolyJet reagents per well with serum free DMEM respectively. Add dilutedreagent to diluted DNA and let transfection complex formed at RT for 15minutes.  For other format of cell culture formats, scale down or up perthe surface area of culture dish.
3. Add transfection complex to L929 cell directly. Transfection is conducted inpresence of serum/antibiotics with transfection volume of 1.0 ml per well of6-well plate.
4. Check transgene expression 24~48 hours post transfection.

選擇GenJetTM，LipoD293TM & PolyJetTMDNA轉染試劑稀釋溶液的小技巧：

選擇何種稀釋液稀釋DNA及轉染試劑，對于制備有效的轉染復合物至關重要。除了溫度，孵育時間外，稀釋液的性質對于制備的轉染復合物亦非常重要，同樣影響DNA轉染效率。根據我們的實驗數據，使用合適的稀釋液得到的轉染效率是使用錯誤稀釋液轉染效率的至少50倍。更為重要的是，實驗者總是忽視稀釋液的重要性，甚至一直未曾意識到正確的稀釋液對形成有效轉染復合物的重要性。

1、為了制備更有效的轉染復合物，稀釋液中千萬不要含有血清、蛋白。

2、盡量使用接近細胞培養基成分的稀釋液，例如：若是你使用DMEM（supplemented with serum and antibiotics）培養HEK293細胞，那么，zui合適的稀釋液是不含血清、抗生素的DMEM：若是您使用RPM1-1640（supplemented with serum andantibiotics）培養Hela細胞，那么zui合適的稀釋液是不含血清、抗生素的RPM1-1640。

3、請勿使用含有未知成分的培養基。例如，切勿使用Opti-MEMTM稀釋GenJet?、PolyJet?及LipoD293? DNA轉染試劑。根據我們的實驗數據，若是使用Opti-MEM稀釋轉染試劑及DNA，那么用于HEK293，Hela，CHO及NIH 3T3細胞的轉染效率至少減少50%。Opti-MEMTM可能含有較少的血清，導致轉染效率的大幅降低。

4、不含血清的高糖DMEM是很好的選擇，可以與其他的生長培養基兼容，如果未能得到較高的轉染效率，您可能會考慮更換稀釋液，若是您不明確如何選擇合適的稀釋液，建議您初次可以嘗試不含血清的高糖DMEM，您應該會得到滿意的轉染效率。