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閱讀：318發(fā)布時(shí)間：2013-10-12
定量系統(tǒng)
前定量蛋白A的方法（如ELISA）受到種種限制，如動(dòng)態(tài)范圍窄、靈敏度低和流程費(fèi)時(shí)費(fèi)力。通常需要對每個(gè)樣品進(jìn)行多次稀釋或開展重復(fù)分析，才能獲得落在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)的結(jié)果。Life Technologies的ProteinSEQ™ 蛋白A定量系統(tǒng)是一個(gè)突破性的免疫分析平臺，它將基于TaqMan® Assay的qPCR分析的靈敏度和動(dòng)態(tài)范圍帶到以抗體為基礎(chǔ)的蛋白分析物檢測中。系統(tǒng)借助鄰位連接分析技術(shù)來定量某一目標(biāo)蛋白。
為了實(shí)現(xiàn)zui寬的動(dòng)態(tài)范圍、zui高的靈敏度和重復(fù)性，他們開發(fā)出一種自動(dòng)化、基于磁珠的固相PLA平臺，適用于MagMAX™ Express-96磁珠處理器。簡單的流程僅包含三步。*步，制備待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。樣品制備包含簡單的加熱/冷卻/離心過程，讓與蛋白A分析物結(jié)合的IgG變性和分離。下一步，設(shè)置平板，而目標(biāo)蛋白的捕獲和探針連接都在MagMAX™ Express-96儀器上自動(dòng)完成。簡單來說，與鏈霉親和素包被磁珠偶聯(lián)的*化的蛋白A抗體可用于捕獲蛋白A。洗滌之后，鄰位探針（結(jié)合有寡核苷酸的蛋白A抗體）與蛋白A目標(biāo)結(jié)合。一旦與目標(biāo)蛋白結(jié)合，探針相互靠近，在與鄰位探針雜交的夾板寡核苷酸（splint oligo）存在時(shí)由連接酶連接。zui后一步，通過qPCR擴(kuò)增連接產(chǎn)物，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定目標(biāo)蛋白的量。
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