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上海麗臣商貿有限公司
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閱讀：241發布時間：2014-1-9
關于ELISA試劑盒實驗相信各位老師都不陌生，ELISA試劑盒實驗一般包含兩個或以上的孵育步驟，中間以洗滌隔開。ELISA通常在96孔板中開展，其上包被了結合抗原或抗體。在封閉步驟后，包被后的平板首先與一抗或抗原孵育。隨后通過一些洗滌步驟去除未結合（低親和力）的抗原-抗體復合物。接著，平板與二抗孵育。這種帶有酶的抗體與高親和力的抗原-抗體復合物結合。之后，又是一輪洗滌。zui后是添加底物并檢測信號。下面就讓上海利域生物科技有限公司為您講解關于洗滌的具體操作。
洗滌參數：
一些參數會影響洗滌步驟的效果。*個主要的參數是洗滌量。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調為高，是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應孔的洗滌量必須相同。ELISA板的制造商通常會在試劑盒的使用手冊中列出包被量。行業中通常使用的包被量是200 µl。如果你的試劑盒也是這樣，那么制造商可能會建議使用300 µl洗滌液進行洗滌，以便清潔整個反應孔的壁。一般來說，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。
洗滌次數：
第二個影響洗滌效果的主要參數是洗滌循環的量。當然，洗滌次數越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會降低信號強度，使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復洗滌三次。不過，ELISA板的制造商會對洗滌次數提出建議。一般而言，制造商包被平板需要的洗滌次數比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板，必須優化洗滌次數。
ELISA實驗雖然看起來有點簡單，但是這并不能成為我們掉以輕心的借口，實驗過程中應該仔細檢查洗滌步驟，保證實驗的結果。
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