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上海麗臣商貿有限公司
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閱讀：247發布時間：2014-2-27
一、實驗目的
1.深入了解ELISA 法測定抗體效價的原理。
2.掌握ELISA 法測定單克隆抗體效價的方法。
二、實驗原理
ELISA 是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。免疫酶技術是將酶標記在抗體/抗原分子上，形成酶標抗體/酶標抗原，稱為酶結合物。該酶結合物的酶在免疫反應后，作用于底物使之呈色，根據顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA 法是免疫酶技術的一種，其特點是利用聚苯乙烯微量反應板(或球)吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫反應和酶促反應都在其中進行。在每次反應后都要反復洗滌，這既保證了反應的定量關系，也避免了末反應的游離抗體/抗原的分離步驟。在ELISA 法中.酶促反應只進行一次，而抗原的免疫反應可進行一次或數次，即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進行免疫反應。
目前常用的幾種ELISA 方法有：測定抗體的間接法，測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗采用間接法測定單克隆抗體效價。其主要過程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應板的凹孔內，加待測抗體，保溫后洗滌以除去未結合的雜蛋白質，加酶標抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應，用目測或光電比色測定抗體含量。
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