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技術(shù)文章

細(xì)胞免疫熒光實驗步驟

閱讀：385發(fā)布時間：2014-5-5

 

1. 細(xì)胞一定要貼在玻片上（可以放入24孔板），為后面照像打基礎(chǔ)。細(xì)胞密度適中，大約60-75%滿片即可，否則容易脫片。
2. 取出細(xì)胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘，現(xiàn)用現(xiàn)配。（以下各步驟切毋使玻片干燥）
3. PBS沖洗
4. 0.1%Triton作用20分鐘
5. PBS沖洗 

6. 10%正常血清封閉10分鐘
7. 加入一抗，4度孵育過夜（找個小瓶蓋將小玻片支起來，抗體就不容易溢出），還要記住“砸片”，就是抗體從較高處落到片子上，以分布均勻。抗體稀釋度1：60，較常用！

8. PBS沖洗4次，各5分鐘
9加入熒光二抗，室溫30分鐘。抗體稀釋度1：400，較常用！
10.  同8。
11. 90%甘油封片。也很關(guān)鍵阿，多封幾次才有體會。
12. 避光保存，或到顯微鏡下觀察。

 


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