當前位置:廣州健侖生物科技有限公司>>技術文章>>黃曲霉毒素B1檢測卡的實驗步驟
1、儀器:均質器 、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)。
2、微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl。
3、試劑:甲醇,正己烷。
樣本準備:
1、樣本處理前須知:實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結果。
2、配液:配液1:樣本提取液 70%甲醇,即V甲醇:V去離子水=7:3。
3、樣本前處理步驟:
3.1 谷物、飼料
1)稱取2g粉碎樣本于離心管中,再根據不同的檢出限要求按下表加入樣本提取液
檢測下限 | 10ppb | 20ppb | 40ppb | 100ppb |
樣本提取液 | 2ml | 4ml | 8ml | 20ml |
振蕩5分鐘,室溫4000轉/分離心5分鐘。
2)取0.1ml上清,加入0.4ml去離子水,混勻備用。
3.2谷物、飼料(須吹干)
若要求檢測下限為5ppb時,可按如下操作:
1)稱取2g粉碎樣本于離心管中,加入4ml樣本提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉/分離心5分鐘;
2)取1ml上層液體在50-60℃條件下用氮氣或空氣吹干;
3)先加入0.25ml 70%甲醇溶解剩下的殘留物,劇烈震蕩2分鐘;再加入1ml去離子水,混勻備用。(注意:這一步甲醇與水的加液順序不能顛倒)
稀釋倍數:2.5倍 檢測下限:5ppb
3.3糧油(菜油、麻油、色拉油、花生油等)
1)稱取2g樣本于離心管中,再根據不同的檢出限要求按下表加入樣本提取液
檢測下限 | 10ppb | 20ppb | 40ppb | 100ppb |
樣本提取液 | 2ml | 4ml | 8ml | 20ml |
然后加入8ml正己烷,振蕩5分鐘,室溫4000轉/分離心5分鐘。
2)去除上層液體,取0.1ml下層液體加入0.4ml去離子水,混勻備用。
實驗步驟:
1、 撕開檢測卡鋁箔包裝袋,取出檢測卡,放于平整、潔凈的臺面上。
2 、用配套吸管吸取已準備好的樣本液體,緩慢、逐滴的(應避免泡沫產生)滴加4-5滴(約150ul)到加樣孔(S)內。
3 、室溫下放置5-8分鐘判斷結果,超過30分鐘的結果無效。
結果判斷:
1.陰性:在觀察孔內,只有對照線區(C)出現一條紫紅色線。
2.陽性:在觀察孔內,檢測線區(T)及對照線區(C)同時出現紫紅色線。抗體滴度越高,檢測線(T)顏色越深。
3.失效:在觀察孔內,對照線區(C)不出現紫紅色線。(注: 去離子水、自來水、生理鹽水不能作為陰性對照。)
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