美國NovaBios基孔肯雅熱抗體檢測試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

本公司專業供應各種進口品牌基孔肯雅熱檢測試劑盒，包括美國的NovaBios、德國NOVA、廣州創侖等CDC品牌。主要包括膠體金、酶免、PCR等方法學。歡迎咨詢

基孔肯雅熱IgM診斷試劑

基孔肯雅熱IgG診斷試劑

基孔肯雅熱ELISA檢測試劑

基孔肯雅熱快速檢測試劑

基孔肯雅病毒核酸檢測試劑盒（熒光探針PCR）

美國CDC的基孔肯雅病毒診斷試劑——美國的NovaBios

德國CDC使用的基孔肯雅病毒診斷試劑——德國NOVA

美國NovaBios基孔肯雅熱抗體檢測試劑盒

【預期用途】 
基孔肯雅IgG/IgM抗體ELISA檢測試劑盒主要用于定性檢測人血清和血漿中抗基孔肯雅病毒的IgG/IgM抗體。 
【實驗原理】 
此試劑盒基于ELISA技術。包被板中包被了抗人IgG抗體，如果人血清或血漿中含有IgG時，則會與其特異性結合，洗板將未結合的物質洗去， 然后加入基孔肯雅抗原溶液，洗板洗去未結合的物質，然后加入鏈霉親和素和基孔肯雅抗體酶聯物。洗板后，加入TMB底物液，顏色變成藍色，加入終止液終止反應，顏色由藍色轉為黃色，zui后用酶標儀在450nm處讀數。 
【試劑組成】 
包被板：12×8可拆卸，包被了抗人IgG抗體，密封在可重封鋁箔袋中 
基孔肯雅溶液1：1瓶包含6mL的基孔肯雅抗原溶液，即用，白蓋 
基孔肯雅溶液2：1瓶包含6mL的生物素化的基孔肯雅抗體，即用，藍色，白蓋 
基孔肯雅IgM陽性質控：1瓶，1.5mL，黃色，即用，紅蓋 
基孔肯雅IgM臨界質控：1瓶， 2mL，黃色，即用，綠蓋 
基孔肯雅IgM陰性質控：1瓶，1.5mL，黃色，即用，藍蓋 
樣本稀釋液： 1瓶包含100mL的即用緩沖液，用于稀釋樣本，pH7.2±0.2，黃色，白蓋 
洗滌液：1瓶，包含50mL  20倍濃縮的緩沖液，（pH7.2±0.2）用于洗板，白蓋 
鏈霉親和素結合液：1瓶包含6mL過氧化物酶結合的鏈霉親和素，即用，紅色，黑蓋 
TMB底物液：1瓶包含15mL  TMB，即用，黃蓋 
終止液：1瓶包含15mL，即用，內含硫酸，0.2mol/l，紅蓋 
【需要的設備和材料】              
固定板
封板片 
酶標儀（450/620nm）              
37℃孵箱 
洗瓶或自動洗板機
10~1000μL的移液器
漩渦混勻器 
蒸餾水或去離子水
一次性試管
計時器 
【儲存和穩定性】 
試劑在有效期內，儲存于2-8℃穩定 
【試劑準備】 
洗滌液的準備 
用雙蒸水稀釋洗滌液，例子：10ml洗滌液+190ml雙蒸水。稀釋好的洗滌液在室溫下5天內有效。 
【樣本的采集和準備】 
這個實驗中使用的樣本是人血清和血漿，如果實驗在樣本采集后的5天內進行，則需要儲存在2-8℃，否則，必須于-20℃到-70℃深度凍存。如果樣本是深度凍存的，在使用前，則需要充分混勻，避免反復凍融。 不推薦使用熱滅活的樣本 
【樣本的稀釋】 
將10μL樣本跟1ml的樣本稀釋液混勻，并用漩渦混勻器充分混勻。
【實驗步驟】 
在開始試驗前，請仔細閱讀試驗說明。結果的可信度是依賴于嚴格地按照實驗說明來進行的，鋪板時zui少留1個孔為空白對照（A1）1個陰性質控孔（B1）2個臨界質控孔（C1+D1）1個陽性質控孔（E1）。開始試驗前，請將所有試劑都平衡到室溫 
1.  吸取50μL的質控品和稀釋過的樣本到相應的孔中，留A1孔做空白對照孔
2.  封板 
3.  在37±1℃下孵育1小時±5分鐘 
4.  當孵育完成時，揭去封板片，棄去反應液，每孔300μL洗滌液，洗板3次，避免溢出。每孔浸泡的時間都必須＞5秒，zui后拍板將殘留的液滴都拍去。 
5.  吸取50μL基孔肯雅溶液1到除了空白對照孔的每個孔中，蓋板 
6.  在室溫孵育30分鐘 
7.  重復步驟4 
8.  將基孔肯雅溶液2跟鏈霉親和素結合物混勻10分鐘 
9.  吸取50μL基孔肯雅溶液2跟鏈霉親和素的復合物到除了空白對照孔的每個孔中，蓋板。 
10.  室溫孵育30分鐘
11.  重復步驟4 
12.  吸取100μL的TMB底物液到每個孔中 
13.  避光孵育15分鐘（精確） 
14.  加入100μL終止液到每個孔中，與加TMB底物液時的間隔和順序都必須一樣 
15.  用酶標儀在加入終止液后30分鐘內與450/620nm處檢測 
【檢測】 
調整酶標儀，以空白對照孔調零，以450nm處檢測所有孔的吸光度值。 
【結果】 
1.  檢測生效的條件 
只有以下條件符合，檢測的結果才能認為的有效的  
空白對照孔    吸光度值＜0.100  
陰性質控孔    吸光度值＜臨界質控  
臨界質控孔    吸光度值0.150-1.300  
陽性質控孔    吸光度值＞臨界質控 
如果以上條件不符合的，那么試驗結果則是無效的，需要重新檢測
2.  結果的計算 
臨界質控平均吸光度值的計算，例子：吸光度1：0.39；吸光度2：0.37                                   
（0.39+0.37）/2=0.38    
平均吸光度值為0.38 
3.  結果的說明 
樣本如果是比臨界值高出10%，則認定為陽性， 
樣本如果是在臨界值上下10%之內，則認定為灰色區（推薦在2-4周之后再次檢測新鮮的樣本，如果樣本仍然是灰色區，可以直接認為是陰性） 
樣本如果是比臨界值低出10%，則認定為陰性 
4.  結果的單位 
病人樣本平均吸光度值×10 = U   
臨界值 
例子： 1.216×10 =32U 
0.38 
臨界值： 10 U 
灰色區：9-11 U 
陰性： ＜9 U 
陽性： ＞11 U

美國NovaBios基孔肯雅熱抗體檢測試劑盒

    基孔肯雅熱的發病機制目前尚不清楚，近年來的研究有如下看法。
    1．病毒直接侵犯：人被感染CHIKV的蚊子叮咬，約２天后即可發病。發病后第1～2天是高病毒血癥期，第3～4天病毒載量下降，通常第5天消失。病毒通過其包膜上的E1、E2蛋白與巨噬細胞、上皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞、室管壁膜細胞、小腦膜細胞等細胞上的受體結合，然后通過網格蛋白(calthrin)介導的細胞內吞作用進入細胞，并在細胞內復制，導致細胞壞死和凋亡。
    病毒還可通過胎盤感染胎兒，導致基孔肯雅熱或胎兒死亡。
    動物實驗證明病毒易侵犯新生小鼠的中樞神經系統、肝、脾及結締組織。
    2．免疫機制：有研究發現，患者病后2～6天血清中一些細胞因子濃度增高，如干擾素g誘導蛋白-10(CXCL-10)、白細胞介素-8(IL-8)、單核細胞化學趨化蛋白-1（MCP-1)和干擾素g誘導的單核因子（MIG/CXCL9)等，而且以CXCL-10增高為主?；颊哐逯懈蓴_素g、腫瘤壞死因子a及Th2細胞因子，如IL-1b、IL-6、IL-10和IL-12的濃度保持在正常范圍。在恢復期，CXCL-10和MCP-1的濃度下降，由于CXCL-10的功能是在細胞免疫反應中對Th1細胞起化學趨化作用，因此病情嚴重程度及進展可能與其濃度持續在高水平相關。另外，動物實驗證明，干擾素a起著主要的抗病毒作用。
    （二）病理改變。
    1．骨骼?。?主要感染成纖維細胞,在肌外膜檢測到大量的病毒，肌束膜和肌內膜有少量的病毒，而且肌外膜可見巨噬細胞浸潤；在肌纖維基底層可見小單核細胞。在感染CHIKV的新生小鼠中可見嚴重的壞死性肌炎，表現為嚴重的肌纖維壞死、淋巴細胞和單核巨噬細胞浸潤。
    ２．關節：關節囊成纖維細胞可見病毒抗原。
    ３. 皮膚：深真皮層的成纖維細胞可見病毒抗原。
    ４．中樞神經系統：小鼠實驗顯示，脈絡叢上皮細胞嚴重的空泡變性，脈絡叢上皮細胞、室管壁膜細胞和小腦膜細胞有大量的病毒，但腦實質及構成血腦屏障的微血管上皮細胞未見明顯改變。
    ５．肝臟：免疫標記及透射電鏡顯示，在病毒感染小鼠的肝竇毛細血管上皮細胞、巨噬細胞和Kupffer細胞可見病毒抗原及出芽。
    ６．脾臟：在紅髓中觀察到病毒抗原。
    四、臨床表現
    本病的潛伏期為2～12天，通常為3～7天。
    （一）急性期。
    1. 發熱： 病人常突然起病，寒戰、發熱，體溫可達39℃，伴有頭痛、基孔肯雅熱、嘔吐、食欲減退，淋巴結腫大。一般發熱1～7天即可退熱，有的病人約3天后再次出現較輕微發熱（雙峰熱），持續3～5天恢復正常。有些患者可有結膜充血和輕度畏光的結膜炎表現。
    2. 皮疹： 80％的患者在發病后2～5天，軀干、四肢的伸展側、手掌和足底出現皮疹，為斑疹、丘疹或紫癜 ,疹間皮膚多為正常 ,部分患者伴有瘙癢感。數天后消退，可伴有輕微脫屑。

美國NovaBios

我司還提供其它進口或國產試劑盒：登革熱、瘧疾、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產品。

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The pathogenesis of Chikungunya fever is unclear, in recent years, the following views.
    1. Virus direct violation: people infected with CHIKV mosquito bites, about 2 days after the disease. 1 to 2 days after the onset of high viremia, 3 to 4 days after the viral load decreased, usually disappear on the 5th day. The virus binds to the receptors on cells such as macrophages, epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, perivascular membrane cells, cerebellar cells, and the like through its E1, E2 proteins on the envelope, and then through the cytosol (calthrin ) - mediated endocytosis into cells and replicate in cells, leading to cell necrosis and apoptosis.
    The virus can also infect the fetus through the placenta, resulting in Chikungunya fever or fetal death.
    Animal experiments have shown that the virus is susceptible to the central nervous system, liver, spleen and connective tissue of newborn mice.
    2. Immunological mechanisms: Some studies have found that patients with 2 to 6 days after the serum levels of some cytokines increased, such as interferon g induced protein-10 (CXCL-10), interleukin-8 (IL-8), monocytes Chemoattractant protein-1 (MCP-1) and interferon g-induced mononuclear factor (MIG / CXCL9), and CXCL-10 increased mainly. Serum concentrations of interferon g, tumor necrosis factor a and Th2 cytokines, such as IL-1b, IL-6, IL-10 and IL-12, remained in the normal range. In the convalescent phase, the concentration of CXCL-10 and MCP-1 decreased, and the CXCL-10 function was chemo-chemotactic effects on Th1 cells in the cellular immune response, and the severity and progression of the CXCL-10 may be associated with a high level The In addition, animal experiments have shown that interferon a plays a major antiviral activity.
    (B) pathological changes.
    1. Skeletal muscle: the main infection of fibroblasts, in the myometrium to detect a large number of viruses, muscle membrane and intima have a small amount of the virus, and the outer membrane visible macrophage infiltration; in the muscle fiber basal layer visible small mononuclear cells The In severe neonatal mice infected with CHIKV, severe necrotizing myositis is manifested as severe muscle fiber necrosis, lymphocytes and monocyte-macrophage infiltration.
    2. Joint: articular capsule fibroblasts visible viral antigen.
    3. Skin: deep dermis fibroblasts visible viral antigens.
    4. Central nervous system: mouse experiments show that choroid plexus epithelial cell severe vacuolar degeneration, choroid plexus epithelial cells, ventricular wall cells and cerebellar cells have a large number of viruses, but the brain parenchyma and constitute the blood-brain barrier microvascular epithelial cells No obvious change.
    5. Liver: Immunolabelling and transmission electron microscopy showed that viral antigens and sprouting were seen in the virus-infected mice with hepatic sinusoidal capillary epithelial cells, macrophages and Kupffer cells.
    6. Spleen: Virus antigens are observed in the red pulp.
    Fourth, clinical manifestations
    The incubation period of this disease is 2 to 12 days, usually 3 to 7 days.
    (A) acute phase.
    1. fever: patients often sudden onset, chills, fever, body temperature up to 39 ℃, accompanied by headache, Chikungunya heat, vomiting, loss of appetite, lymph nodes. General fever 1 to 7 days to fever, and some patients about 3 days after the emergence of a slight fever (bimodal heat), for 3 to 5 days to return to normal. Some patients may have conjunctival hyperemia and mild photophobia.
    2. Rash: 80% of patients in the onset of 2 to 5 days after the trunk, limbs stretch side, palms and foot rash, rash, pimples or purpura, rash between the skin is normal, some patients with itching sense. After a few days subsided, may be accompanied by a slight desquamation.