美國NovaBios黃熱病毒酶聯免疫試劑盒（ELISA方法）

廣州健侖生物科技有限公司

本公司專業供應各種進口品牌黃熱病檢測試劑盒，包括美國的NovaBios、廣州創侖等CDC品牌。主要包括膠體金、酶免、PCR等方法學。歡迎咨詢

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黃熱病毒核酸檢測試劑盒（熒光探針PCR）

美國CDC的黃熱病毒診斷試劑——美國的NovaBios

美國NovaBios黃熱病毒酶聯免疫試劑盒（ELISA方法）

【黃熱病簡介】
黃熱病，歷*稱為黃色杰克，黃色瘟疫或青銅約翰，是一種急性病毒性疾病。在大多數情況下，癥狀包括發熱，寒戰，食欲不振，特別是在背部的肌肉痛，和頭痛。癥狀通常在五天內改善。在一些人在一天內改善，發燒回來，腹痛發生，肝損傷開始導致黃色皮膚。如果發生這種情況，出血和腎臟問題的風險也增加。

【檢測原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特異性抗原。將對照或測試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測試劑加入到孔中。TMB底物用于顯現HRP酶反應。TMB由HRP催化以產生在加入酸性停止溶液后變為黃色的藍色產物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM/IgG量成比例。外徑在微板讀數器中在450nm下通過分光亮度計測量吸亮度，然后可以計算YFV-IgM/IgG的濃度。

產品規格：96T/盒
檢測范圍：定性
靈敏度：定性
儲存和使用期：2-8℃ 儲存12個月
產品應用：用于定性檢測人血清，血漿，細胞培養上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。

【套件組件】
1.一個96孔板預涂
2.陽性對照：0.5ml
3.陰性對照：0.5ml
4.洗滌緩沖液（30×）：20 ml。稀釋：1:30
5.樣品稀釋緩沖液：6ml
6.6HRP酶聯試劑（RTU）：6ml
7.終止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培養箱
2.酶標儀（波長：450nm）
3.精確的移液器和一次性移液器吸頭
4.自動洗板機
5.ELISA振蕩器
1.5ml管
7.板蓋
8.吸收濾紙
9.100ml和1L體積量筒。

【操作程序】
A.制備樣品和試劑
1. 樣品
收集并立即分析測試樣品（2小時內）后立即分離。或等分并長期儲存在-20°C。避免多個凍融循環。
細胞培養上清：以約2000-3000×rpm離心20分鐘，以去除沉淀，立即分析或分裝，并儲存于-20℃。
血清：在室溫下凝結血清（約4小時）。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分，并儲存在-20°C。
血漿：用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
尿：在無菌容器中收集，以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
組織：組織勻漿的制備將根據組織類型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。稱重樣品并用PBS（Ph 7.4）勻化，并對細胞懸浮液進行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測定或等分并儲存在-80℃。
（注意：1.*凝結血液樣品，離心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作試驗樣品防腐劑，因為它抑制HRP。）

2.洗滌緩沖液
用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍（1/30）（即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中）。

B.測定程序
在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個測試的標準曲線。
1.在預涂板上分別設置陽性/陰性，測試樣品和對照（零）孔，并記錄它們的位置。
2.將50μl的陰性和陽性對照等分到設定的孔中。
3.向對照（零）孔中加入50μl樣品稀釋緩沖液。
4.向測試樣品孔中加入50μl適當稀釋的樣品（樣品稀釋比例：1：5）。在底部加入溶液而不接觸側壁。搖動平板以混合內容物。
5.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
6.取下蓋子并通過在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來丟棄板內容物。
7.棄去溶液，用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時候*干燥。
手動清洗：丟棄溶液，不要接觸側壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿每個孔，并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內容物，并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自動洗滌：棄去所有孔中的溶液，并用洗滌緩沖液洗滌板5次（用緩沖液過量填滿孔）。在zui后的洗滌之后，翻轉該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設置為1分鐘的浸泡時間。
8.向每個孔中加入50μlHRP結合物的試劑（對照孔除外）。在每個孔底部加入溶液，不要接觸側壁。
9.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
10.取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板5次。
11.向每個孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。
12.向每個孔中加入50μl終止液，充分混勻。顏色應立即變為黃色。
13.閱讀O.D.在微板讀數器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內。對于計算，（相對O.D.450）=（每個孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。標準曲線可以作為每種標準溶液（Y）的相對O.D.450與標準溶液（X）的相應濃度作圖。可以從標準曲線插入樣品的人類YFV-IgM濃度。
14.注意：如果稀釋樣品，稀釋倍數乘以內插法得到稀釋前的濃度。

C.結果確定
1.試驗有效性：陽性對照的平均值≥1.00; 陰性對照的平均值≤0.10。
2.臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=負控制的平均值+0.15
3.陰性結果：如果OD值<CUT OFF，樣品為人YFV-IgM陰性。
4.陽性結果：如果OD值≥CUTOFF，樣品為人類YFV-IgM陽性。

D.注意事項
1.在實驗之前，離心每個試劑盒組分數分鐘，將所有試劑倒入試管底部。
2.在混合或重新組裝部件時避免起泡或氣泡。
3.洗滌緩沖液可結晶并分離。如果發生這種情況，請加熱管以溶解。
4.建議每個對照和樣品一式兩份或重復測量三次。
5.不要讓板在任何時候*干燥！這可以使板上的生物材料失活。
6.不要重復使用移液器吸頭和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中過期的組件或組件。
8.將TMB底物B儲存在黑暗中，并且為了避免板溫育對于溫度差的邊緣效應，建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量，不要將殘留溶液倒回到小瓶中。

美國NovaBios

流行情況/黃熱病 黃熱病
人類記載的*次黃熱病流行發生在1648年的墨西哥的尤卡坦半島。此前在加勒比海地區已有該病存在。
17至19世紀，該病通過交通運輸、人員流動傳人北美和歐洲后，成為美洲、非洲及歐洲部分地區zui嚴重的傳染病之一，曾造成人群大量死亡及部分社會活動癱瘓。
1741年，英國27000名士兵攻打哥倫比亞，因20000人感染黃熱病而潰不成軍；1762年英國殖民軍侵略古巴，15000名士兵中8000人死于黃熱病；
1793年，美國費城黃熱病大流行，全市1/5人口死于黃熱病，導致社會*解體。其后疫情沿密西西比河深人到北美中心地帶，美國至少有50萬人罹患此病；
1800年，西班牙發生黃熱病，死亡至少6萬人；
1851年，巴西首都里約熱內盧因黃熱病至少死亡23000人；
巴拿馬運河開鑿*期工程中曾因本病嚴重流行而迫使工程停頓；
1826年英國殖民者人侵非洲時發生本病，535名殖民軍在兩個月中死亡115人；
1940年以前，黃熱病在非洲同樣是大小流行不斷造成人員大量死亡。
1959年，扎尹爾和蘇丹相繼出現暴發流行。1960～1962年埃塞俄比亞發生嚴重大流行，100萬人口中約10%感染本病，其中死亡3萬人。
20世紀60年代以來，非洲和南美洲的黃熱病暴發一直未曾中斷。每年向世界衛生組織報告的病例數波動在近百例至數千例不等。
1987～1991年間，黃熱病在尼日利亞流行，幾十萬人受到感染。
2012年11月1日，位于蘇丹西部的中達爾富爾州和南達爾富爾州有47名公民感染黃熱病死亡，蘇丹黃熱病患者已超過92例。黃熱病 至2012年11月5日，蘇丹達爾富爾地區黃熱病疫情，疑似病例達到194例，其中包括67例死亡病例，死亡率為34.5%。黃熱病
病黃熱病理/黃熱病 黃熱病
病原學
病原為黃熱病病毒（yellow fever virus），屬黃病毒科（family Flaviviridae）的黃病毒屬（genus Flavivirus）（過去的蟲媒病毒B組）與同屬的登革熱病毒等有交叉免疫反應。病毒顆粒呈球形，直徑37～50nm，外有脂蛋白包膜，包膜表面有刺突。病毒基因組為單股正鏈RNA，分子量約為3.8×106 ，長約11kb，只含有一個長的開放讀碼框架，約96%的核苷酸在此框架內。黃病毒基因組分為二個區段：5'端1/4編碼該病毒3個結構蛋白，即C蛋白（衣殼蛋白）、M蛋白（膜蛋白）和E蛋白（包膜蛋白）；3'端3/4編碼7個非結構蛋白。基因組的5'端和3'端均有一段非編碼區。
E蛋白是主要的包膜糖蛋白，含黃熱病毒血凝素和中和抗原決定簇，可能是某些宿主細胞表面受體的配體，當它與受體結合，可對細胞產生感染。E蛋白可能是一種膜融合蛋白，可誘導病毒顆粒的包膜與細胞膜融合，促使病毒顆粒進入細胞而引起感染。M蛋白能導致病毒的感染性增加，并形成病毒顆粒的表面結構。非結構蛋白的作用尚不十分清楚，在病毒免疫反應中可能起重要作用。
黃熱病病毒有嗜內臟如肝、腎、心等（人和靈長類）和嗜神經（小鼠）的特性。經雞胚多次傳代后可獲得作為疫苗的毒力減弱株。易被熱、常用消毒劑、黃熱病、去氧膽酸鈉等迅速滅活，在50%甘油溶液中可存活數月，在凍干情況下可保持活力多年。小鼠和恒河猴是常用的易感實驗動物。

美國NovaBios

我司還提供其它進口或國產試劑盒：登革熱、瘧疾、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產品。

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Epidemic situation / yellow fever yellow fever
The first yellow fever epidemic recorded by humans in the 1648 Mexican Yucatan Peninsula. The disease had previously existed in the Caribbean.
From the 17th to the 19th century, the disease became one of the most serious infectious diseases in the Americas, Africa and parts of Europe through transportation and personnel transmission to North America and Europe, which caused a large number of deaths and paralysis of some social activities.
In 1741, the United Kingdom 27,000 soldiers attacked Colombia, because 20000 people infected with yellow fever and collapse; 1762 British colonial army invaded Cuba, 15,000 soldiers in 8000 people died of yellow fever;
In 1793, the United States Philadelphia yellow fever pandemic, the city's 1/5 population died of yellow fever, leading to the community compley disintegrated. Followed by the epidemic along the Mississippi River deep to the North American center, the United States at least 50 million people suffering from the disease;
1800 years, the occurrence of yellow fever in Spain, killing at least 60,000 people;
In 1851, the Brazilian capital Rio de Janeiro due to yellow fever at least 23,000 people died;
Panama Canal digging the first phase of the project because of the serious epidemic and forced the project to stop;
1826 British colonial invasion of Africa when the disease, 535 colonial troops died in two months 115;
Before 1940, yellow fever in Africa is also the size of the popular continue to cause a large number of deaths.
In 1959, Zaire and Sudan have been outbreaks. 1960 ~ 1962 Ethiopia serious pandemic, 1 million people about 10% of the population infected with the disease, of which 30,000 people died.
Since the 1960s, the outbreak of yellow fever in Africa and South America has not been interrupted. The number of cases reported annually to the World Health Organization varies from nearly one hundred to several thousand cases.
Between 1987 and 1991, yellow fever was prevalent in Nigeria and hundreds of thousands were infected.
On November 1, 2012, 47 people in northern Darfur and Southern Darfur were infected with yellow fever and more than 92 cases of Sudanese yellow fever. Yellow fever to November 5, 2012, Sudan in Darfur, yellow fever epidemic, suspected cases reached 194 cases, including 67 cases of death, the mortality rate was 34.5%. Yellow fever
Disease yellow fever pathology / yellow fever yellow fever
Etiology
The pathogen is yellow fever virus, genus Flavivirus of the family Flaviviridae (the last group of parasitic viruses) has a cross-immune response with the same dengue virus. Virus particles were spherical, diameter 37 ~ 50nm, outside the lipoprotein capsule, capsule surface spikes. The viral genome is a single stranded stranded RNA with a molecular weight of about 3.8 x 106 and a length of about 11 kb, containing only a long open reading frame, about 96% of the nucleotides within this framework. The flavivirus genome is divided into two sections: the 5 'end 1/4 encodes the three structural proteins of the virus, namely protein C (capsid protein), M protein (membrane protein) and E protein (envelope protein) Terminal 3/4 encodes 7 nonstructural proteins. The 5 'and 3' ends of the genome have a noncoding region.
E protein is the main envelope glycoprotein, yellow fever virus hemagglutinin and neutralizing antigenic determinants, may be the ligand of some host cell surface receptors, when it binds to the receptor, can produce infection to cells. E protein may be a membrane fusion protein that can induce the envelope of the viral particles to fuse with the cell membrane, causing the virus particles to enter the cell and cause infection. M protein can cause increased infectivity of the virus and form the surface structure of the virus particles. The role of nonstructural proteins is not yet clear and may play an important role in the viral immune response.
Yellow fever virus has the characteristics of indeccupal such as liver, kidney, heart (human and primate) and neurotropic (mouse). After repeated passage of chicken embryos can be obtained as a virulence of the vaccine attenuated strain. Easy to be hot, commonly used disinfectant, yellow fever, sodium deoxycholate and other rapid inactivation, in 50% glycerol solution can survive for several months, in the case of freeze can remain viable for many years. Mice and rhesus are commonly used susceptible experimental animals.