美國NovaBios黃熱病ELISA診斷試劑盒（酶聯免疫法）

廣州健侖生物科技有限公司

本公司專業供應各種進口品牌黃熱病檢測試劑盒，包括美國的NovaBios、廣州創侖等CDC品牌。主要包括膠體金、酶免、PCR等方法學。歡迎咨詢

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黃熱病毒核酸檢測試劑盒（熒光探針PCR）

美國CDC的黃熱病毒診斷試劑——美國的NovaBios

美國NovaBios黃熱病ELISA診斷試劑盒（酶聯免疫法）

【黃熱病簡介】
黃熱病，歷*稱為黃色杰克，黃色瘟疫或青銅約翰，是一種急性病毒性疾病。在大多數情況下，癥狀包括發熱，寒戰，食欲不振，特別是在背部的肌肉痛，和頭痛。癥狀通常在五天內改善。在一些人在一天內改善，發燒回來，腹痛發生，肝損傷開始導致黃色皮膚。如果發生這種情況，出血和腎臟問題的風險也增加。

【檢測原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特異性抗原。將對照或測試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測試劑加入到孔中。TMB底物用于顯現HRP酶反應。TMB由HRP催化以產生在加入酸性停止溶液后變為黃色的藍色產物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM/IgG量成比例。外徑在微板讀數器中在450nm下通過分光亮度計測量吸亮度，然后可以計算YFV-IgM/IgG的濃度。

產品規格：96T/盒
檢測范圍：定性
靈敏度：定性
儲存和使用期：2-8℃ 儲存12個月
產品應用：用于定性檢測人血清，血漿，細胞培養上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。

【套件組件】
1.一個96孔板預涂
2.陽性對照：0.5ml
3.陰性對照：0.5ml
4.洗滌緩沖液（30×）：20 ml。稀釋：1:30
5.樣品稀釋緩沖液：6ml
6.6HRP酶聯試劑（RTU）：6ml
7.終止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培養箱
2.酶標儀（波長：450nm）
3.精確的移液器和一次性移液器吸頭
4.自動洗板機
5.ELISA振蕩器
1.5ml管
7.板蓋
8.吸收濾紙
9.100ml和1L體積量筒。

【操作程序】
A.制備樣品和試劑
1. 樣品
收集并立即分析測試樣品（2小時內）后立即分離?；虻确植㈤L期儲存在-20°C。避免多個凍融循環。
細胞培養上清：以約2000-3000×rpm離心20分鐘，以去除沉淀，立即分析或分裝，并儲存于-20℃。
血清：在室溫下凝結血清（約4小時）。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分，并儲存在-20°C。
血漿：用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
尿：在無菌容器中收集，以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
組織：組織勻漿的制備將根據組織類型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。稱重樣品并用PBS（Ph 7.4）勻化，并對細胞懸浮液進行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測定或等分并儲存在-80℃。
（注意：1.*凝結血液樣品，離心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作試驗樣品防腐劑，因為它抑制HRP。）

2.洗滌緩沖液
用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍（1/30）（即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中）。

B.測定程序
在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個測試的標準曲線。
1.在預涂板上分別設置陽性/陰性，測試樣品和對照（零）孔，并記錄它們的位置。
2.將50μl的陰性和陽性對照等分到設定的孔中。
3.向對照（零）孔中加入50μl樣品稀釋緩沖液。
4.向測試樣品孔中加入50μl適當稀釋的樣品（樣品稀釋比例：1：5）。在底部加入溶液而不接觸側壁。搖動平板以混合內容物。
5.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
6.取下蓋子并通過在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來丟棄板內容物。
7.棄去溶液，用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時候*干燥。
手動清洗：丟棄溶液，不要接觸側壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿每個孔，并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內容物，并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自動洗滌：棄去所有孔中的溶液，并用洗滌緩沖液洗滌板5次（用緩沖液過量填滿孔）。在zui后的洗滌之后，翻轉該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設置為1分鐘的浸泡時間。
8.向每個孔中加入50μlHRP結合物的試劑（對照孔除外）。在每個孔底部加入溶液，不要接觸側壁。
9.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
10.取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板5次。
11.向每個孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。
12.向每個孔中加入50μl終止液，充分混勻。顏色應立即變為黃色。
13.閱讀O.D.在微板讀數器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內。對于計算，（相對O.D.450）=（每個孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。標準曲線可以作為每種標準溶液（Y）的相對O.D.450與標準溶液（X）的相應濃度作圖?？梢詮臉藴是€插入樣品的人類YFV-IgM濃度。
14.注意：如果稀釋樣品，稀釋倍數乘以內插法得到稀釋前的濃度。

C.結果確定
1.試驗有效性：陽性對照的平均值≥1.00; 陰性對照的平均值≤0.10。
2.臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=負控制的平均值+0.15
3.陰性結果：如果OD值<CUT OFF，樣品為人YFV-IgM陰性。
4.陽性結果：如果OD值≥CUTOFF，樣品為人類YFV-IgM陽性。

D.注意事項
1.在實驗之前，離心每個試劑盒組分數分鐘，將所有試劑倒入試管底部。
2.在混合或重新組裝部件時避免起泡或氣泡。
3.洗滌緩沖液可結晶并分離。如果發生這種情況，請加熱管以溶解。
4.建議每個對照和樣品一式兩份或重復測量三次。
5.不要讓板在任何時候*干燥！這可以使板上的生物材料失活。
6.不要重復使用移液器吸頭和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中過期的組件或組件。
8.將TMB底物B儲存在黑暗中，并且為了避免板溫育對于溫度差的邊緣效應，建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量，不要將殘留溶液倒回到小瓶中。

美國NovaBios

感染期
起病急驟，伴有寒戰，繼以迅速上升的高熱、劇烈頭痛、全身疼痛、顯著乏力、黃熱病、嘔吐、便秘等。嘔吐物初為胃內容，繼呈膽汁樣?；颊邿┰杲箲]、顏面緋紅、結膜充血、舌紅絳、膚干燥。心脈率初與發熱平行增速，以后漸轉為相對緩脈。本期持續約3天，期末有輕度黃疸、蛋白尿等。
中毒期
一般開始于病程第4天，部分病例可有短暫（數小天至1天）的癥狀緩解期，體溫稍降復升而呈鞍形。本期仍有高熱及心率減慢，黃疸加深，黃熱病因此得名?；颊呱裰镜⒚嫔野?、嘔吐頻繁。蛋白尿更為顯著，伴少尿。本期的突出癥狀為各處出血現象如牙齦出血、鼻衄、皮膚瘀點和瘀斑，胃腸道、尿路和子宮出血等。嘔吐物為黑色變性血液。心臟常擴大，心音變弱，血壓偏低。嚴重患者可出現譫妄、昏迷、頑固呃逆、尿閉等，并伴有大量黑色嘔吐物。本期持續3～4天，死亡大多發生于本期內。
恢復期
體溫于病程7～8天下降至正常，癥狀和蛋白尿逐漸消黃熱病，但乏力可持續1～2周甚至數月。在本期內仍需密切注意心臟情況。一般無后遺癥。
并發癥/黃熱病 黃熱病
重要并發癥有休克、腸出血、心臟損害、多臟器功能減退以及DIC、細菌性肺炎、腮腺炎等。
輔助檢查/黃熱病 黃熱病
一般常規及生化檢查
黃熱病
黃熱病圖冊
早期中性粒細胞數減少，血小板計數正?；蛏詼p少。血清膽紅素、ALT、AST等升高。病程等4～5天尿蛋白可增高至3～5g/L。大便隱血常呈陽性。腦脊液壓力常增高，細胞數正常。心電圖可示ST-T波異常、PR和QT間期改變等。凝血時間、凝血酶原時間及部分凝血活酶時間延長見于黃疸病例。
病毒分離
取病程4日以內的患者血液注入乳鼠腦內或傳代的Vero細胞，可分離出病毒，并用血清免疫學進行鑒定。
血清免疫學試驗
取急性期及發病后2～4周的恢復期血清作IgM抗獲ELISA（IgM ontibodycapture ELISA）、血凝抑制試驗、補體結合試驗或中和試驗。IgM抗體、血凝抑制抗體和中抗體在發病后5～7天內出現，CF抗體在病后7～14天內出現。恢復期血清的抗體效價呈4倍以上增高者可確診為本病。由于IgM和CF抗體存在的時間相對較短，效價升高時提示近期感染。如血清內有特異性IgG抗體且效價無動態變化，則提示病人過去曾感染過本病。
采用ELISA方法檢測發病早期血清中的病毒抗原，有助早期診斷，此方法特異，敏感性較高，可在數小時內獲結果，在一般實驗室均可采用。
病毒核酸的檢測
應用逆轉錄（RT）-PCR方法檢測黃病毒RNA，特異性強，靈敏度高，國內外均有報道，為本病的早期、快速診斷提供了可靠的方法，但此項檢查需要一定的技術和條件，一般實驗室難以推廣。
肝穿刺檢查
對患者不宜進行肝穿刺，因可導致出血等嚴重后果。對死亡病例可用內臟穿黃熱病截取小塊肝組織作病理檢查、小鼠接種和酶免疫測定（應用單克隆抗體或人多克隆IgM抗體）。

美國NovaBios

我司還提供其它進口或國產試劑盒：登革熱、瘧疾、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產品。

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Infection period
Sudden onset, accompanied by chills, followed by rapid rise in high fever, severe headache, body pain, significant fatigue, yellow fever, vomiting, constipation and so on. Vomit early for the stomach content, followed by bile-like. Patients irritability anxiety, facial crimson, conjunctival hyperemia, red tongue, dry skin. Heart rate and fever parallel to the growth rate, after gradually turn to the relative slow pulse. This period lasts about 3 days, at the end of mild jaundice, proteinuria and so on.
Poisoning period
Generally began in the course of the first 4 days, some cases may have a short (few days to 1 day) symptoms of remission, the body temperature gradually increased and was saddle-shaped. This period is still high fever and heart rate, jaundice deepened, yellow fever so named. Patients with indifferent, looking pale, frequent vomiting. Proteinuria is more significant, with oliguria. This period of prominent symptoms for bleeding everywhere, such as gum bleeding, epistaxis, skin petechia and ecchymosis, gastrointestinal tract, urinary tract and uterine bleeding. The vomit is black degenerative blood. Often expand the heart, heart sounds weak, low blood pressure. Serious patients can appear delirium, coma, stubborn hiccups, urinary closure, and accompanied by a large number of black vomit. This period lasts 3 to 4 days, most of the deaths occurred in this period.
Recovery period
Body temperature in the course of 7 to 8 days down to normal, symptoms and proteinuria gradually yellow fever, but the fatigue can last 1 to 2 weeks or even months. In the current period still need to pay close attention to the heart situation. Generally no sequelae.
Complications / yellow fever Yellow fever
Important complications are shock, intestinal bleeding, heart damage, multiple organ dysfunction and DIC, bacterial pneumonia, mumps and so on.
Auxiliary examination / yellow fever yellow fever
General routine and biochemical tests
Yellow fever
Yellow fever
Early neutrophil count decreased, plaet count normal or slightly reduced. Serum bilirubin, ALT, AST and other elevated. Duration of 4 to 5 days urine protein can be increased to 3 ~ 5g / L. Fecal occult blood often positive. Cerebrospinal fluid pressure often increased, the normal number of cells. ECG can show ST-T wave anomalies, PR and QT interval changes. Coagulation time, prothrombin time and partial thromboplastin prolongation were seen in cases of jaundice.
Virus isolation
Patients taking the disease within 4 days of blood into the brain or passaged rat Vero cells, can be isolated from the virus, and serum immunology for identification.
Serum immunological test
Serum from IgM ontibodycapture ELISA, hemagglutination inhibition test, complement binding test or neutralization test was performed in the acute phase and 2 to 4 weeks after onset. IgM antibodies, hemagglutination inhibitory antibodies and antibodies in the onset of 5 to 7 days after the emergence of CF antibodies in the 7 to 14 days after the disease appears. Recovery of serum antibody titer was more than 4 times higher can be diagnosed as the disease. Since the presence of IgM and CF antibodies is relatively short, the increase in potency suggests a recent infection. Such as serum within the specific IgG antibody and no significant changes in titer, then prompted the patient had infected the disease in the past.
Detection of virus antigens in early serum by ELISA is helpful for early diagnosis. This method is specific and sensitive, and can be obtained in a few hours, which can be used in general laboratory.
Detection of viral nucleic acids
Application of reverse transcription (RT) -PCR method to detect flavivirus RNA, specificity, high sensitivity, both at home and abroad have been reported for the early and rapid diagnosis of this disease provides a reliable method, but the inspection requires a certain amount of technology and Conditions, the general laboratory is difficult to promote.
Liver puncture
Patients should not be liver puncture, can lead to bleeding and other serious consequences. Pathological examination, mouse inoculation and enzyme immunoassay (monoclonal antibody or human polyclonal IgM antibody) can be used for pathologic examination of small pieces of liver tissue.