美國NovaBios黃熱病病毒核酸PCR檢測試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

本公司專業供應各種進口品牌黃熱病檢測試劑盒，包括美國的NovaBios、廣州創侖等CDC品牌。主要包括膠體金、酶免、PCR等方法學。歡迎咨詢

黃熱病毒IgM、IgG、ELISA檢測試劑、黃熱病快速檢測試劑盒、

黃熱病毒核酸檢測試劑盒（熒光探針PCR）

美國CDC的黃熱病毒診斷試劑——美國的NovaBios

美國NovaBios黃熱病病毒核酸PCR檢測試劑盒

【黃熱病簡介】
黃熱病，歷*稱為黃色杰克，黃色瘟疫或青銅約翰，是一種急性病毒性疾病。在大多數情況下，癥狀包括發熱，寒戰，食欲不振，特別是在背部的肌肉痛，和頭痛。癥狀通常在五天內改善。在一些人在一天內改善，發燒回來，腹痛發生，肝損傷開始導致黃色皮膚。如果發生這種情況，出血和腎臟問題的風險也增加。

【檢測原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特異性抗原。將對照或測試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測試劑加入到孔中。TMB底物用于顯現HRP酶反應。TMB由HRP催化以產生在加入酸性停止溶液后變為黃色的藍色產物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM/IgG量成比例。外徑在微板讀數器中在450nm下通過分光亮度計測量吸亮度，然后可以計算YFV-IgM/IgG的濃度。

產品規格：96T/盒
檢測范圍：定性
靈敏度：定性
儲存和使用期：2-8℃ 儲存12個月
產品應用：用于定性檢測人血清，血漿，細胞培養上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。

【套件組件】
1.一個96孔板預涂
2.陽性對照：0.5ml
3.陰性對照：0.5ml
4.洗滌緩沖液（30×）：20 ml。稀釋：1:30
5.樣品稀釋緩沖液：6ml
6.6HRP酶聯試劑（RTU）：6ml
7.終止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培養箱
2.酶標儀（波長：450nm）
3.精確的移液器和一次性移液器吸頭
4.自動洗板機
5.ELISA振蕩器
1.5ml管
7.板蓋
8.吸收濾紙
9.100ml和1L體積量筒。

【操作程序】
A.制備樣品和試劑
1. 樣品
收集并立即分析測試樣品（2小時內）后立即分離。或等分并長期儲存在-20°C。避免多個凍融循環。
細胞培養上清：以約2000-3000×rpm離心20分鐘，以去除沉淀，立即分析或分裝，并儲存于-20℃。
血清：在室溫下凝結血清（約4小時）。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分，并儲存在-20°C。
血漿：用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
尿：在無菌容器中收集，以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
組織：組織勻漿的制備將根據組織類型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。稱重樣品并用PBS（Ph 7.4）勻化，并對細胞懸浮液進行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測定或等分并儲存在-80℃。
（注意：1.*凝結血液樣品，離心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作試驗樣品防腐劑，因為它抑制HRP。）

2.洗滌緩沖液
用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍（1/30）（即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中）。

B.測定程序
在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個測試的標準曲線。
1.在預涂板上分別設置陽性/陰性，測試樣品和對照（零）孔，并記錄它們的位置。
2.將50μl的陰性和陽性對照等分到設定的孔中。
3.向對照（零）孔中加入50μl樣品稀釋緩沖液。
4.向測試樣品孔中加入50μl適當稀釋的樣品（樣品稀釋比例：1：5）。在底部加入溶液而不接觸側壁。搖動平板以混合內容物。
5.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
6.取下蓋子并通過在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來丟棄板內容物。
7.棄去溶液，用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時候*干燥。
手動清洗：丟棄溶液，不要接觸側壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿每個孔，并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內容物，并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自動洗滌：棄去所有孔中的溶液，并用洗滌緩沖液洗滌板5次（用緩沖液過量填滿孔）。在zui后的洗滌之后，翻轉該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設置為1分鐘的浸泡時間。
8.向每個孔中加入50μlHRP結合物的試劑（對照孔除外）。在每個孔底部加入溶液，不要接觸側壁。
9.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
10.取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板5次。
11.向每個孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。
12.向每個孔中加入50μl終止液，充分混勻。顏色應立即變為黃色。
13.閱讀O.D.在微板讀數器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內。對于計算，（相對O.D.450）=（每個孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。標準曲線可以作為每種標準溶液（Y）的相對O.D.450與標準溶液（X）的相應濃度作圖。可以從標準曲線插入樣品的人類YFV-IgM濃度。
14.注意：如果稀釋樣品，稀釋倍數乘以內插法得到稀釋前的濃度。

C.結果確定
1.試驗有效性：陽性對照的平均值≥1.00; 陰性對照的平均值≤0.10。
2.臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=負控制的平均值+0.15
3.陰性結果：如果OD值<CUT OFF，樣品為人YFV-IgM陰性。
4.陽性結果：如果OD值≥CUTOFF，樣品為人類YFV-IgM陽性。

D.注意事項
1.在實驗之前，離心每個試劑盒組分數分鐘，將所有試劑倒入試管底部。
2.在混合或重新組裝部件時避免起泡或氣泡。
3.洗滌緩沖液可結晶并分離。如果發生這種情況，請加熱管以溶解。
4.建議每個對照和樣品一式兩份或重復測量三次。
5.不要讓板在任何時候*干燥！這可以使板上的生物材料失活。
6.不要重復使用移液器吸頭和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中過期的組件或組件。
8.將TMB底物B儲存在黑暗中，并且為了避免板溫育對于溫度差的邊緣效應，建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量，不要將殘留溶液倒回到小瓶中。

美國NovaBios

【產品名稱】
通用名稱：黃熱病病毒核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
英文名稱：Detection Kit for Yellow Fever virus RNA (PCR-Fluorescence Probing)
【包裝規格】大包裝，24 反應/盒；大包裝，48 反應/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于檢測黃熱病病毒所致的急性傳染病的快速初篩檢測，結合病毒的分離鑒定，對快速檢測黃熱病病原有很重要的指導意義。檢測結果僅供研究，不用于臨床診斷。
【檢驗原理】
本試劑盒基于實時熒光 PCR 技術，選取黃熱病病毒核酸片斷一個相對保守區作為擴增靶區域，設計特異性引物及熒光探針，通過一步法實時熒光 PCR 體系擴增對黃熱病病毒進行定性檢測。反應體系中除一對特異性引物和一條特異性熒光探針外，還配以對應的 PCR 反應 Buffer、逆轉錄酶、熱啟動 Taq 酶、核苷酸單體（dNTPs）、Mg2+等成分，可實現對黃熱病病毒核酸靈敏特異地檢測。
【主要組成成份】  
PCR 檢測試劑、YFV PCR 反應液 A、408µl/管、1、特異性引物、探針、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液等
（大包裝，24 反應/盒）、YFV PCR 反應液 B、72µl/管、1、熱啟動 Taq 酶、c-MMLV 酶等
PCR 檢測試劑、YFV PCR 反應液 A、816µl/管、1、特異性引物、探針、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液等
（大包裝，48 反應/盒）、YFV PCR 反應液 B、144µl/管、1、熱啟動 Taq 酶、c-MMLV 酶等
質控品、陰性質控品、 400µl/管、1、生理鹽水
（大包裝 2 種規格）、YFV 陽性質控品、 400µl/管、1、含目的片段的重組質粒

不同批號試劑盒的以上成分不可以互換使用。
需自備的試劑：核酸提取試劑
質控品說明：陽性質控品為含目的片段的重組質粒，使用時無需進行核酸提取。
【儲存條件及有效期】
試劑盒保存于-20±5℃，有效期 9 個月。
試劑盒在 37℃可保存72h；試劑在 4℃可保存7天；避免反復凍融，反復凍融次數不超過 7 次；試劑開瓶次數不超過 7 次。運輸采用干冰保持低溫，運輸時間不應超過 3 天。試劑盒生產日期見產品標簽。
【適用儀器】包括 ABI7500、ABI7300、LightCycler480 等熒光定量 PCR 儀。
【樣本要求】
1.適用樣品類型：血清
3.樣品采集（注意無菌操作）
4.人血清標本
無菌采集發病后 5 天內靜脈血 3～5ml，室溫靜置 30 分鐘使其凝固，然后 1500～2000rpm 離心 10min，去除纖維蛋白和血紅球，收集血清于 2ml 無菌螺口塑料管中。
5.樣品保存和運送
人血清標本裝入螺口塑料血清管，用耐低溫油性記號筆記上編號，于-70℃以下運輸或保存待檢。標本處理和 RNA 提取亦可參照有關國家標準或有關行業標準中推薦的方法。
【檢測方法】
1.樣本處理和核酸提取（樣本處理區）
建議取 200μl 液態樣本進行核酸提取。可采用中山大學達安基因股份有限公司生產的核酸提取試劑盒，請按照試劑盒說明書進行操作；也可選擇其他合適的商業化產品。
本試劑盒中的陰性質控品參與提取，用于對環境進行監控；YFV 陽性質控品不參與提取，用于 PCR 檢測試劑的質控。
2.PCR 試劑準備（試劑準備區）
從試劑盒中取出 YFV PCR 反應液 A、YFV PCR 反應液 B，室溫融化后振蕩混勻，8,000rpm 離心數秒后使用。
2.1YFV 反應體系配制
取適量 PCR 反應管，每管加入 YFV PCR 反應液 A 17µl、YFV PCR 反應液 B 3µl（也可根據 PCR 反應用量，計算各組分所需總量，混勻后分裝20µl 于單個 PCR 反應管中）；

美國NovaBios

我司還提供其它進口或國產試劑盒：登革熱、瘧疾、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產品。

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【公司名稱】 廣州健侖生物科技有限公司
【市場部】    楊永漢

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【騰訊  】 2042552662
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TRANSMISSION
Vectorborne transmission occurs via the bite of an infected mosquito, primarily Aedes or Haemagogus spp. Nonhuman and human primates are the main reservoirs of the virus, with anthroponotic (human-to-vector-to-human) transmission occurring. There are 3 transmission cycles for yellow fever: sylvatic (jungle), intermediate (savannah), and urban.
The sylvatic (jungle) cycle involves transmission of the virus between nonhuman primates and mosquito species found in the forest canopy. The virus is transmitted via mosquitoes from monkeys to humans when the humans encroach into the jungle during occupational or recreational activities.
In Africa, an intermediate (savannah) cycle involves transmission of YFV from tree hole-breeding Aedes spp. to humans living or working in jungle border areas. In this cycle, the virus may be transmitted from monkeys to humans or from human to human via these mosquitoes.
The urban cycle involves transmission of the virus between humans and peridomestic mosquitoes, primarily Ae. aegypti.
Humans infected with YFV experience the highest levels of viremia and can transmit the virus to mosquitoes shortly before onset of fever and for the first 3–5 days of illness. Given the high level of viremia, bloodborne transmission theoretically can occur via transfusion or needlesticks. One case of perinatal transmission of wild-type YFV has been documented from a woman who developed symptoms of yellow fever 3 days before giving birth. The infant tested positive for YFV RNA and died of fulminant yellow fever on the 12th day of life.
EPIDEMIOLOGY
Yellow fever occurs in sub-Saharan Africa and tropical South America, where it is endemic and intermittently epidemic (see Tables 3-22 and 3-23 for a list of countries with risk of YFV transmission). Most yellow fever disease in humans is due to sylvatic or intermediate transmission cycles. However, urban yellow fever occurs periodically in Africa and sporadically in the Americas. In areas of Africa with persistent circulation of YFV, natural immunity accumulates with age, and thus, infants and children are at highest risk for disease. In South America, yellow fever occurs most frequently in unimmunized young men who are exposed to mosquito vectors through their work in forested areas.
RISK FOR TRAVELERS
A traveler’s risk for acquiring yellow fever is determined by various factors, including immunization status, location of travel, season, duration of exposure, occupational and recreational activities while traveling, and local rate of virus transmission at the time of travel. Although reported cases of human disease are the principal indicator of disease risk, case reports may be absent because of a low level of transmission, a high level of immunity in the population (because of vaccination, for example), or failure of local surveillance systems to detect cases. This “epidemiologic silence” does not equate to absence of risk and should not lead to travel without taking protective measures.
YFV transmission in rural West Africa is seasonal, with an elevated risk during the end of the rainy season and the beginning of the dry season (usually July–October). However, YFV may be episodically transmitted by Ae. aegypti even during the dry season in both rural and densely settled urban areas.
The risk for infection in South America is highest during the rainy season (January–May, with a peak incidence in February and March). Given the high level of viremia that may occur in infected humans and the widespread distribution of Ae. aegypti in many towns and cities, South America is at risk for a large-scale urban epidemic.
From 1970 through 2015, a total of 10 cases of yellow fever were reported in unvaccinated travelers from the United States and Europe who traveled to West Africa (5 cases) or South America (5 cases). Eight (80%) of these 10 travelers died. There has been only 1 documented case of yellow fever in a vaccinated traveler. This nonfatal case occurred in a traveler from Spain who visited several West African countries in 1988. In early 2016, >15 long-term travelers from Africa and Asia developed yellow fever disease after visiting Angola, where one of the largest urban outbreaks was occurring. Reportedly, none of the ill travelers was vaccinated.
The risk of acquiring yellow fever is difficult to predict because of variations in ecologic determinants of virus transmission. For a 2-week stay, the estimated risks for illness and death due to yellow fever for an unvaccinated traveler visiting an endemic area in:
West Africa are 50 per 100,000 and 10 per 100,000, respectively