美國NovaBios美國CDC使用的黃熱病病毒診斷試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

本公司專業供應各種進口品牌黃熱病檢測試劑盒，包括美國的NovaBios、廣州創侖等CDC品牌。主要包括膠體金、酶免、PCR等方法學。歡迎咨詢

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黃熱病毒核酸檢測試劑盒（熒光探針PCR）

非洲安哥拉工作、旅游黃熱病檢測試劑盒

美國CDC的黃熱病毒診斷試劑——美國的NovaBios

美國NovaBios美國CDC使用的黃熱病病毒診斷試劑盒

【黃熱病簡介】
黃熱病，歷*稱為黃色杰克，黃色瘟疫或青銅約翰，是一種急性病毒性疾病。在大多數情況下，癥狀包括發熱，寒戰，食欲不振，特別是在背部的肌肉痛，和頭痛。癥狀通常在五天內改善。在一些人在一天內改善，發燒回來，腹痛發生，肝損傷開始導致黃色皮膚。如果發生這種情況，出血和腎臟問題的風險也增加。

【檢測原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特異性抗原。將對照或測試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測試劑加入到孔中。TMB底物用于顯現HRP酶反應。TMB由HRP催化以產生在加入酸性停止溶液后變為黃色的藍色產物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM/IgG量成比例。外徑在微板讀數器中在450nm下通過分光亮度計測量吸亮度，然后可以計算YFV-IgM/IgG的濃度。

產品規格：96T/盒
檢測范圍：定性
靈敏度：定性
儲存和使用期：2-8℃ 儲存12個月
產品應用：用于定性檢測人血清，血漿，細胞培養上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。

【套件組件】
1.一個96孔板預涂
2.陽性對照：0.5ml
3.陰性對照：0.5ml
4.洗滌緩沖液（30×）：20 ml。稀釋：1:30
5.樣品稀釋緩沖液：6ml
6.6HRP酶聯試劑（RTU）：6ml
7.終止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培養箱
2.酶標儀（波長：450nm）
3.精確的移液器和一次性移液器吸頭
4.自動洗板機
5.ELISA振蕩器
1.5ml管
7.板蓋
8.吸收濾紙
9.100ml和1L體積量筒。

【操作程序】
A.制備樣品和試劑
1. 樣品
收集并立即分析測試樣品（2小時內）后立即分離。或等分并長期儲存在-20°C。避免多個凍融循環。
細胞培養上清：以約2000-3000×rpm離心20分鐘，以去除沉淀，立即分析或分裝，并儲存于-20℃。
血清：在室溫下凝結血清（約4小時）。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分，并儲存在-20°C。
血漿：用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
尿：在無菌容器中收集，以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
組織：組織勻漿的制備將根據組織類型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。稱重樣品并用PBS（Ph 7.4）勻化，并對細胞懸浮液進行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測定或等分并儲存在-80℃。
（注意：1.*凝結血液樣品，離心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作試驗樣品防腐劑，因為它抑制HRP。）

2.洗滌緩沖液
用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍（1/30）（即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中）。

B.測定程序
在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個測試的標準曲線。
1.在預涂板上分別設置陽性/陰性，測試樣品和對照（零）孔，并記錄它們的位置。
2.將50μl的陰性和陽性對照等分到設定的孔中。
3.向對照（零）孔中加入50μl樣品稀釋緩沖液。
4.向測試樣品孔中加入50μl適當稀釋的樣品（樣品稀釋比例：1：5）。在底部加入溶液而不接觸側壁。搖動平板以混合內容物。
5.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
6.取下蓋子并通過在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來丟棄板內容物。
7.棄去溶液，用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時候*干燥。
手動清洗：丟棄溶液，不要接觸側壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿每個孔，并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內容物，并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自動洗滌：棄去所有孔中的溶液，并用洗滌緩沖液洗滌板5次（用緩沖液過量填滿孔）。在zui后的洗滌之后，翻轉該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設置為1分鐘的浸泡時間。
8.向每個孔中加入50μlHRP結合物的試劑（對照孔除外）。在每個孔底部加入溶液，不要接觸側壁。
9.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
10.取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板5次。
11.向每個孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。
12.向每個孔中加入50μl終止液，充分混勻。顏色應立即變為黃色。
13.閱讀O.D.在微板讀數器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內。對于計算，（相對O.D.450）=（每個孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。標準曲線可以作為每種標準溶液（Y）的相對O.D.450與標準溶液（X）的相應濃度作圖。可以從標準曲線插入樣品的人類YFV-IgM濃度。
14.注意：如果稀釋樣品，稀釋倍數乘以內插法得到稀釋前的濃度。

C.結果確定
1.試驗有效性：陽性對照的平均值≥1.00; 陰性對照的平均值≤0.10。
2.臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=負控制的平均值+0.15
3.陰性結果：如果OD值<CUT OFF，樣品為人YFV-IgM陰性。
4.陽性結果：如果OD值≥CUTOFF，樣品為人類YFV-IgM陽性。

D.注意事項
1.在實驗之前，離心每個試劑盒組分數分鐘，將所有試劑倒入試管底部。
2.在混合或重新組裝部件時避免起泡或氣泡。
3.洗滌緩沖液可結晶并分離。如果發生這種情況，請加熱管以溶解。
4.建議每個對照和樣品一式兩份或重復測量三次。
5.不要讓板在任何時候*干燥！這可以使板上的生物材料失活。
6.不要重復使用移液器吸頭和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中過期的組件或組件。
8.將TMB底物B儲存在黑暗中，并且為了避免板溫育對于溫度差的邊緣效應，建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量，不要將殘留溶液倒回到小瓶中。

美國NovaBios

黃熱病病因
主要病因： 黃熱病毒
一、發病原因
黃熱病病毒屬蟲媒病毒B組披膜病毒科，病毒直徑約22～38nm，呈球形，有包膜，含單股正鏈RNA。易被熱、常用消毒劑、黃熱病、去氧膽酸鈉等滅活，但在血中能于4℃保存1個月，在50%甘油中于0℃下可存活數月，于-70℃或冷凍干燥條件下可保持活力數年。
zui初分離的黃熱病毒Asibi株通過組織培養弱化成17D株，用以制備減毒活疫苗，預防效果良好。
病原為黃熱病病毒(yellow fever virus)，屬黃病毒科(family Flaviviridae)的黃病毒屬(genus Flavivirus)，(過去的蟲媒病毒B組)與同屬的登革熱病毒等有交叉免疫反應。病毒顆粒呈球形，直徑37～50nm，外有脂蛋白包膜包紅，包膜表面有刺突。黃病毒基因組分為二個區段：5'端1/4編碼該病毒3個結構蛋白，即C蛋白(衣殼蛋白)、M蛋白(膜蛋白)和E蛋白(包膜蛋白);3'端3/4編碼7個非結構蛋白。基因組的5'端和3端均有一段非編碼區。
黃熱病病毒有嗜內臟如肝、腎、心等(人和靈長類)和嗜神經(小鼠)的特性。經雞胚多次傳代后可獲得作為疫苗的毒力減弱株。易被熱、常用消毒劑、黃熱病、去氧膽酸鈉等迅速滅活，在50%甘油溶液中可存活數月，在凍干情況下可保持活力多年。小鼠和恒河猴是常用的易感實驗動物。
二、發病機制
病毒侵入人體后擴散到局部淋巴結，并在其中復制繁殖，數日后進入血循環形成病毒血癥，主要累及肝、脾、腎、淋巴結、骨髓、橫紋肌等。以后病毒從血中消黃熱病，而在脾、骨髓、淋巴結等處仍可檢出。病毒的強毒株常主要侵犯肝臟，并引起嚴重病變。
黃熱病的病理損害是由于病毒聚集于不同器官和組織并在其中繁殖所致，主要受損臟器為肝、腎、心，其他組織器官亦可有不同程度的退行性變。
肝臟病變主要在小葉中帶，肝細胞混濁腫脹，胞核變大，呈多發性微小空泡性脂肪改變，凝固性壞死及嗜酸透明變性。炎癥反應輕微或缺乏，無明顯組織增生。嚴重肝臟病變可導致深度黃疸、出血及低血糖等。腎臟病變輕重不一，自腎小管上皮濁腫至腎小管壞死，特殊染色可見腎小球基底膜增厚，球囊間隙與近端腎小管腔內有蛋白質物質。遠端腎小管存在透明與色素管型。腎功能減退和尿毒癥系因血容量減少，腎小管壞死等所引起。心肌有廣泛退行性變和脂肪浸潤。重癥病例可有灶性出血，病變常累及竇房結和希氏束，臨床可出現心率減慢、心律黃熱病常、心衰等癥狀。腦部偶見水腫及小的出血灶。組織學變化以細胞變性、脂肪浸潤、壞死，而無明顯的炎癥細胞浸潤為特點。病灶呈散在性分布。

美國NovaBios

我司還提供其它進口或國產試劑盒：登革熱、瘧疾、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產品。

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Causes of yellow fever
The main cause: yellow fever virus
First, the cause of the disease
Yellow fever virus is a parasite virus group B Phytophagidae, the virus diameter of about 22 ~ 38nm, spherical, with capsule, containing single strand of positive RNA. Easy to be hot, commonly used disinfectant, yellow fever, sodium deoxycholate and other inactivation, but in the blood can be stored at 4 ℃ for 1 month in 50% glycerol at 0 ℃ can survive for several months, 70 ℃ or freeze-drying conditions can be maintained for several years.
The initially isolated yellow fever virus, Asibi, was weakened into tissue 17D by tissue culture to prepare attenuated live vaccines with good control effect.
The pathogen is yellow fever virus, genus Flavivirus belonging to family Flaviviridae, and the last group of parasitic viruses have a cross-immune response with the same dengue virus. Virus particles were spherical, diameter 37 ~ 50nm, outside the lipoprotein capsule package red, capsule surface spikes. The flavivirus genome is divided into two sections: the 5 'end 1/4 encodes the three structural proteins of the virus, namely protein C (capsid protein), M protein (membrane protein) and E protein (envelope protein) Terminal 3/4 encodes 7 nonstructural proteins. The 5 'and 3 ends of the genome have a noncoding region.
Yellow fever virus has the characteristics of indeccupal such as liver, kidney, heart (human and primate) and neurotropic (mouse). After repeated passage of chicken embryos can be obtained as a virulence of the vaccine attenuated strain. Easy to be hot, commonly used disinfectant, yellow fever, sodium deoxycholate and other rapid inactivation, in 50% glycerol solution can survive for several months, in the case of freeze can remain viable for many years. Mice and rhesus are commonly used susceptible experimental animals.
Second, the pathogenesis
After the virus invades the human body after the spread to the local lymph nodes, and in which reproduction and reproduction, a few days later into the blood circulation to form viremia, mainly involving the liver, spleen, kidney, lymph nodes, bone marrow, striated muscle and so on. After the virus from the blood yellow fever, and in the spleen, bone marrow, lymph nodes, etc. can still be detected. Virus virulent strains often violate the liver and cause serious lesions.
Pathogen damage of yellow fever is due to the virus gathered in different organs and tissues and breeding in which the main damaged organs for the liver, kidney, heart, other tissues and organs can also have varying degrees of degeneration.
Liver lesions mainly in the lobular zone, liver cells turbid swelling, the nucleus becomes larger, showed multiple small vacuoles of fat changes, coagulation necrosis and eosinophilic transparent degeneration. Inflammation is mild or absent, with no obvious tissue hyperplasia. Severe liver disease can lead to deep jaundice, bleeding and hypoglycemia. Kidney lesions vary, from the renal tubular epithelial swelling to renal tubular necrosis, special staining can be seen glomerular basement membrane thickening, balloon space and proximal renal tubular cavity with protein material. Distal renal tubules exist transparent and pigment tube type. Renal dysfunction and uremia due to reduced blood volume, renal tubular necrosis caused by. Myocardium has extensive degeneration and fat infiltration. Severe cases can be foci bleeding, lesions often involve sinus node and Xi's bundle, clinical heart rate can be slowed down, heart rhythm, often, heart failure and other symptoms. Brain edema and small bleeding. Histological changes are characterized by cell degeneration, fat infiltration, necrosis, and no significant inflammatory cell infiltration. Lesions were scattered in the distribution.