美國NovaBios 黃熱病IgG抗體ELISA檢測試劑盒Yellow fever（YFV-IgG）

廣州健侖生物科技有限公司

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黃熱病毒核酸檢測試劑盒（熒光探針PCR）

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美國CDC的黃熱病毒診斷試劑——美國的NovaBios

美國NovaBios 黃熱病IgG抗體ELISA檢測試劑盒Yellow fever（YFV-IgG）

【黃熱病簡介】
黃熱病，歷*稱為黃色杰克，黃色瘟疫或青銅約翰，是一種急性病毒性疾病。在大多數(shù)情況下，癥狀包括發(fā)熱，寒戰(zhàn)，食欲不振，特別是在背部的肌肉痛，和頭痛。癥狀通常在五天內(nèi)改善。在一些人在一天內(nèi)改善，發(fā)燒回來，腹痛發(fā)生，肝損傷開始導致黃色皮膚。如果發(fā)生這種情況，出血和腎臟問題的風險也增加。

【檢測原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特異性抗原。將對照或測試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測試劑加入到孔中。TMB底物用于顯現(xiàn)HRP酶反應。TMB由HRP催化以產(chǎn)生在加入酸性停止溶液后變?yōu)辄S色的藍色產(chǎn)物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM/IgG量成比例。外徑在微板讀數(shù)器中在450nm下通過分光亮度計測量吸亮度，然后可以計算YFV-IgM/IgG的濃度。

產(chǎn)品規(guī)格：96T/盒
檢測范圍：定性
靈敏度：定性
儲存和使用期：2-8℃ 儲存12個月
產(chǎn)品應用：用于定性檢測人血清，血漿，細胞培養(yǎng)上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。

【套件組件】
1.一個96孔板預涂
2.陽性對照：0.5ml
3.陰性對照：0.5ml
4.洗滌緩沖液（30×）：20 ml。稀釋：1:30
5.樣品稀釋緩沖液：6ml
6.6HRP酶聯(lián)試劑（RTU）：6ml
7.終止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培養(yǎng)箱
2.酶標儀（波長：450nm）
3.精確的移液器和一次性移液器吸頭
4.自動洗板機
5.ELISA振蕩器
1.5ml管
7.板蓋
8.吸收濾紙
9.100ml和1L體積量筒。

【操作程序】
A.制備樣品和試劑
1. 樣品
收集并立即分析測試樣品（2小時內(nèi)）后立即分離。或等分并長期儲存在-20°C。避免多個凍融循環(huán)。
細胞培養(yǎng)上清：以約2000-3000×rpm離心20分鐘，以去除沉淀，立即分析或分裝，并儲存于-20℃。
血清：在室溫下凝結(jié)血清（約4小時）。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分，并儲存在-20°C。
血漿：用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內(nèi)以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
尿：在無菌容器中收集，以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
組織：組織勻漿的制備將根據(jù)組織類型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。稱重樣品并用PBS（Ph 7.4）勻化，并對細胞懸浮液進行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測定或等分并儲存在-80℃。
（注意：1.*凝結(jié)血液樣品，離心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作試驗樣品防腐劑，因為它抑制HRP。）

2.洗滌緩沖液
用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍（1/30）（即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中）。

B.測定程序
在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個測試的標準曲線。
1.在預涂板上分別設置陽性/陰性，測試樣品和對照（零）孔，并記錄它們的位置。
2.將50μl的陰性和陽性對照等分到設定的孔中。
3.向?qū)φ眨悖┛字屑尤?0μl樣品稀釋緩沖液。
4.向測試樣品孔中加入50μl適當稀釋的樣品（樣品稀釋比例：1：5）。在底部加入溶液而不接觸側(cè)壁。搖動平板以混合內(nèi)容物。
5.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
6.取下蓋子并通過在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來丟棄板內(nèi)容物。
7.棄去溶液，用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時候*干燥。
手動清洗：丟棄溶液，不要接觸側(cè)壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿每個孔，并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內(nèi)容物，并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自動洗滌：棄去所有孔中的溶液，并用洗滌緩沖液洗滌板5次（用緩沖液過量填滿孔）。在zui后的洗滌之后，翻轉(zhuǎn)該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設置為1分鐘的浸泡時間。
8.向每個孔中加入50μlHRP結(jié)合物的試劑（對照孔除外）。在每個孔底部加入溶液，不要接觸側(cè)壁。
9.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
10.取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板5次。
11.向每個孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。
12.向每個孔中加入50μl終止液，充分混勻。顏色應立即變?yōu)辄S色。
13.閱讀O.D.在微板讀數(shù)器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內(nèi)。對于計算，（相對O.D.450）=（每個孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。標準曲線可以作為每種標準溶液（Y）的相對O.D.450與標準溶液（X）的相應濃度作圖。可以從標準曲線插入樣品的人類YFV-IgM濃度。
14.注意：如果稀釋樣品，稀釋倍數(shù)乘以內(nèi)插法得到稀釋前的濃度。

C.結(jié)果確定
1.試驗有效性：陽性對照的平均值≥1.00; 陰性對照的平均值≤0.10。
2.臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=負控制的平均值+0.15
3.陰性結(jié)果：如果OD值<CUT OFF，樣品為人YFV-IgM陰性。
4.陽性結(jié)果：如果OD值≥CUTOFF，樣品為人類YFV-IgM陽性。

D.注意事項
1.在實驗之前，離心每個試劑盒組分數(shù)分鐘，將所有試劑倒入試管底部。
2.在混合或重新組裝部件時避免起泡或氣泡。
3.洗滌緩沖液可結(jié)晶并分離。如果發(fā)生這種情況，請加熱管以溶解。
4.建議每個對照和樣品一式兩份或重復測量三次。
5.不要讓板在任何時候*干燥！這可以使板上的生物材料失活。
6.不要重復使用移液器吸頭和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中過期的組件或組件。
8.將TMB底物B儲存在黑暗中，并且為了避免板溫育對于溫度差的邊緣效應，建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量，不要將殘留溶液倒回到小瓶中。

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診斷原則/黃熱病毒 黃熱病
重癥病例的診斷一般無困難，流行病學資料及一些特殊臨床癥狀有重要參考價值。輕癥和隱黃熱病染不易確診，常需依賴血清免疫學試驗包括單克隆抗體、ELISA等技術(shù)始能得出結(jié)論，也可采用PCR檢測血標本的病毒，必要時作血液的乳鼠腦內(nèi)接種以分離病毒。若患者以往未患過同屬病毒感染，則血凝抑制試驗、中和試驗、補結(jié)試驗等的陽性結(jié)果即可藉以作出診斷。如第2份血清中仍無特異性抗體的出現(xiàn)，則可將黃熱病的可能性除外。
臨床表現(xiàn)/黃熱病毒 黃熱病
臨床特征有發(fā)熱、劇烈頭痛、顏面顯著充血、明顯相對緩脈、大量黑色嘔吐物、大量蛋白尿、黃疸等。黃熱病毒感染后，出現(xiàn)臨床疾病，其余為隱黃熱病染。潛伏期為7日，輕癥可僅表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、輕度蛋白尿等，而不伴有黃疸和出血，持續(xù)數(shù)日后即恢復。重癥一般可分為感染期、中毒期和恢復期。
本病的潛伏期為3～6天zui長可達13天感染后大部分病人為輕型或亞臨床感染者僅少數(shù)病人病情嚴重終至死亡(約占5%～15%)
  (一)感染期(病毒血癥期) 急起高熱可達40℃以上可伴畏寒或寒顫劇烈頭痛背痛腿痛和全身衰竭眼部充血鼻衄黃熱病嘔吐舌尖及舌緣鮮紅中央有苔相對緩脈上腹不適壓痛明顯隨病情逐漸加重病人煩躁不安第3天出現(xiàn)黃疸第4天出現(xiàn)蛋白尿血白細胞總數(shù)及中性粒細胞比例下降本期持續(xù)3～4天
  (二)中毒期 (器官損傷期) 病毒血癥期后病程第4天左右病人癥狀可出現(xiàn)短暫的緩解體溫降低癥狀改善但幾小時～24小時后癥狀再度出現(xiàn)并加重 表現(xiàn)為熱度上升心率減慢心音低鈍血壓降低黃疸加深尿蛋白量增多頻繁嘔吐上腹痛更明顯各種出血征象相繼出現(xiàn)如牙齦出血鼻衄皮膚瘀斑嘔血黑糞血尿子宮出血等如出現(xiàn)頻繁呃逆或嘔吐鮮血黑便昏迷譫妄無尿等均為病情轉(zhuǎn)危的先兆常于第7～9天內(nèi)死亡偶見暴發(fā)型病例在病程第2-3天死亡而無明顯肝腎損害 該期一般3～4天少數(shù)病例可延長至2周以上
  (三)恢復期 從病程第78天開始體溫下降尿蛋白逐漸消黃熱病黃疸漸退 食欲漸漸恢復乏力可持續(xù)1～2周一般無后遺癥。

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我司還提供其它進口或國產(chǎn)試劑盒：登革熱、瘧疾、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產(chǎn)品。

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Diagnostic principle / yellow fever Yellow fever
The diagnosis of severe cases is generally difficult, epidemiological data and some special clinical symptoms have important reference value. Mild and cryptogenic fever is difficult to diagnose, often rely on serum immunological tests, including monoclonal antibodies, ELISA and other technologies can be concluded, can also be used to detect blood samples of the virus, if necessary, Inoculated to isolate the virus. If the patient has not previously suffered from the same virus infection, hemagglutination inhibition test, neutralization test, patch test and other positive results can be made to make a diagnosis. If there is no specific antibody in the second serum, the possibility of yellow fever may be excluded.
Clinical manifestations / yellow fever Yellow fever
Clinical features are fever, severe headache, facial hyperemia, significantly relative slow pulse, a large number of black vomit, a lot of proteinuria, jaundice and so on. Yellow fever virus infection, the emergence of clinical disease, the rest of the hidden yellow fever. Incubation period of 7 days, mild can only show fever, headache, mild proteinuria, etc., without jaundice and bleeding, after a few days to recover. Severe can be divided into general infection, poisoning and recovery period.
The incubation period of the disease for 3 to 6 days up to 13 days after infection Most patients with mild or subclinical infection only a few patients with serious illness to death (about 5% to 15%)
  (A) infection period (viremia period) anxious high fever up to 40 ℃ or more can be accompanied by chills or chills severe headache back pain leg pain and systemic failure eye congestion nose epistaxis yellow fever vomiting tongue and tongue bright red central Moss relative slow pulse epigastric discomfort tenderness with the disease gradually increased patient irritability on the first 3 days of jaundice on the first 4 days of protein white blood cell count and the proportion of neutrophils decreased this period lasted 3 to 4 days
  (2) poisoning period (organ injury period) viremia course of disease after about 4 days of patients with symptoms can be short-term relief of body temperature reduction symptoms improved after a few hours to 24 hours after the symptoms re-emergence and increased performance for the heat rise heart rate slowed down Heart tone low blunt blood pressure to reduce jaundice to increase the amount of urine protein increased vomiting upper abdominal pain more obvious signs of bleeding have appeared, such as gums bleeding nosebleed skin ecchymosis blood nausea black urine blood uterine bleeding such as frequent hiccups or vomiting blood black coma delirium Urine, etc. are often threatened by the disease often died in the first 7 to 9 days occasionally fulminant cases died in the second day of the course of disease without significant liver and kidney damage in the period of 3 to 4 days a few cases can be extended to 2 weeks the above
  (C) recovery period from the beginning of the 78th day of the body began to decline in urine protein gradually yellow fever jaundice gradually decreased appetite gradually recover from fatigue 1 to 2 weeks generally no sequelae.