美國NovaBios 黃熱病酶免試劑盒（ELISA黃熱病）

廣州健侖生物科技有限公司

本公司專業供應各種進口品牌黃熱病檢測試劑盒，包括美國的NovaBios、廣州創侖等CDC品牌。主要包括膠體金、酶免、PCR等方法學。歡迎咨詢

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黃熱病毒核酸檢測試劑盒（熒光探針PCR）

非洲安哥拉工作、旅游黃熱病檢測試劑盒

美國CDC的黃熱病毒診斷試劑——美國的NovaBios

美國NovaBios 黃熱病酶免試劑盒（ELISA黃熱病）

【黃熱病簡介】
黃熱病，歷*稱為黃色杰克，黃色瘟疫或青銅約翰，是一種急性病毒性疾病。在大多數情況下，癥狀包括發熱，寒戰，食欲不振，特別是在背部的肌肉痛，和頭痛。癥狀通常在五天內改善。在一些人在一天內改善，發燒回來，腹痛發生，肝損傷開始導致黃色皮膚。如果發生這種情況，出血和腎臟問題的風險也增加。

【檢測原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特異性抗原。將對照或測試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測試劑加入到孔中。TMB底物用于顯現HRP酶反應。TMB由HRP催化以產生在加入酸性停止溶液后變為黃色的藍色產物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM/IgG量成比例。外徑在微板讀數器中在450nm下通過分光亮度計測量吸亮度，然后可以計算YFV-IgM/IgG的濃度。

產品規格：96T/盒
檢測范圍：定性
靈敏度：定性
儲存和使用期：2-8℃ 儲存12個月
產品應用：用于定性檢測人血清，血漿，細胞培養上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。

【套件組件】
1.一個96孔板預涂
2.陽性對照：0.5ml
3.陰性對照：0.5ml
4.洗滌緩沖液（30×）：20 ml。稀釋：1:30
5.樣品稀釋緩沖液：6ml
6.6HRP酶聯試劑（RTU）：6ml
7.終止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培養箱
2.酶標儀（波長：450nm）
3.精確的移液器和一次性移液器吸頭
4.自動洗板機
5.ELISA振蕩器
1.5ml管
7.板蓋
8.吸收濾紙
9.100ml和1L體積量筒。

【操作程序】
A.制備樣品和試劑
1. 樣品
收集并立即分析測試樣品（2小時內）后立即分離。或等分并長期儲存在-20°C。避免多個凍融循環。
細胞培養上清：以約2000-3000×rpm離心20分鐘，以去除沉淀，立即分析或分裝，并儲存于-20℃。
血清：在室溫下凝結血清（約4小時）。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分，并儲存在-20°C。
血漿：用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
尿：在無菌容器中收集，以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
組織：組織勻漿的制備將根據組織類型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。稱重樣品并用PBS（Ph 7.4）勻化，并對細胞懸浮液進行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測定或等分并儲存在-80℃。
（注意：1.*凝結血液樣品，離心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作試驗樣品防腐劑，因為它抑制HRP。）

2.洗滌緩沖液
用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍（1/30）（即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中）。

B.測定程序
在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個測試的標準曲線。
1.在預涂板上分別設置陽性/陰性，測試樣品和對照（零）孔，并記錄它們的位置。
2.將50μl的陰性和陽性對照等分到設定的孔中。
3.向對照（零）孔中加入50μl樣品稀釋緩沖液。
4.向測試樣品孔中加入50μl適當稀釋的樣品（樣品稀釋比例：1：5）。在底部加入溶液而不接觸側壁。搖動平板以混合內容物。
5.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
6.取下蓋子并通過在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來丟棄板內容物。
7.棄去溶液，用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時候*干燥。
手動清洗：丟棄溶液，不要接觸側壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿每個孔，并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內容物，并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自動洗滌：棄去所有孔中的溶液，并用洗滌緩沖液洗滌板5次（用緩沖液過量填滿孔）。在zui后的洗滌之后，翻轉該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設置為1分鐘的浸泡時間。
8.向每個孔中加入50μlHRP結合物的試劑（對照孔除外）。在每個孔底部加入溶液，不要接觸側壁。
9.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
10.取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板5次。
11.向每個孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。
12.向每個孔中加入50μl終止液，充分混勻。顏色應立即變為黃色。
13.閱讀O.D.在微板讀數器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內。對于計算，（相對O.D.450）=（每個孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。標準曲線可以作為每種標準溶液（Y）的相對O.D.450與標準溶液（X）的相應濃度作圖。可以從標準曲線插入樣品的人類YFV-IgM濃度。
14.注意：如果稀釋樣品，稀釋倍數乘以內插法得到稀釋前的濃度。

C.結果確定
1.試驗有效性：陽性對照的平均值≥1.00; 陰性對照的平均值≤0.10。
2.臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=負控制的平均值+0.15
3.陰性結果：如果OD值<CUT OFF，樣品為人YFV-IgM陰性。
4.陽性結果：如果OD值≥CUTOFF，樣品為人類YFV-IgM陽性。

D.注意事項
1.在實驗之前，離心每個試劑盒組分數分鐘，將所有試劑倒入試管底部。
2.在混合或重新組裝部件時避免起泡或氣泡。
3.洗滌緩沖液可結晶并分離。如果發生這種情況，請加熱管以溶解。
4.建議每個對照和樣品一式兩份或重復測量三次。
5.不要讓板在任何時候*干燥！這可以使板上的生物材料失活。
6.不要重復使用移液器吸頭和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中過期的組件或組件。
8.將TMB底物B儲存在黑暗中，并且為了避免板溫育對于溫度差的邊緣效應，建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量，不要將殘留溶液倒回到小瓶中。

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4.開展蚊媒應急控制
　　與其他蚊媒傳染病相同，降低蚊蟲密度是控制疫情的關鍵措施。一旦發現病例報告，要立即采取消滅蚊蟲孳生地、殺滅成蚊等措施控制媒介密度，防止發生疾病傳播。
　　5.提高黃熱病發現和應對能力
　　建議有條件的省級疾控中心和口岸城市的疾控中心建立實驗室檢測技術和方法，做好技術和試劑儲備。
　　各地衛生部門應組織印發國家的相關技術指南，提高醫務人員對黃熱病的發現、識別能力，提高疾控人員的流行病學調查和疫情處置能力。
黃熱病 (yellow fever) 是一種由黃熱病毒引起,經蚊傳播的急性傳染病。臨床主要表現為發熱、黃染、出血等。本病主要在中南美洲和非洲的熱帶地區流行，通過蚊和非人靈長類之間周期性地發生自然感染循環。
　　    一、病原學
　　黃熱病毒（yellow fever virus）屬于黃病毒科（Flaviviridae）的黃病毒屬（Flavivirus），病毒顆粒呈球形，直徑37-50 nm，外有脂質包膜，表面有棘突。病毒基因組為單股正鏈RNA，分子量約為3.8×106。典型的黃熱病毒含有10862個核苷酸，由一個10233個核苷酸的單一讀碼框架和較短的5’端非編碼區以及3’端的非編碼區組成。編碼3個結構蛋白和8個非結構蛋白。
　　病毒E蛋白是主要的包膜糖蛋白，含黃熱病毒血凝素和中和抗原決定簇。M蛋白能導致病毒的感染性增加，并形成病毒顆粒的表面結構。
　　該病毒抵抗力弱，易被熱、黃熱病、去氧膽酸鈉和常用消毒劑等迅速滅活。
　　黃熱病毒可與黃病毒科其他成員如登革病毒、西尼羅病毒、圣路易腦炎病毒產生交叉血清學反應。
　　二、流行病學
　　   （一）傳染源。
　　感染黃熱病的人和猴是本病的主要傳染源。城市型的主要傳染源為病人及隱黃熱病染者，特別是發病4日以內的患者。叢林型的主要傳染源為猴及其他非人靈長類。蚊吮吸病人或病猴血液后經9-12天即具傳染性。受感染的蚊可終生帶毒，并可經卵傳遞。
　　黃熱病的隱黃熱病染和輕型病例遠較重癥患者為多，這些病例對本病的傳播起著極為重要的作用。
　　（二）傳播途徑。
　　本病通過蚊叮咬傳播。埃及伊蚊是城市型黃熱病*傳播媒介，以人-埃及伊蚊-人的方式循環。叢林型的媒介蚊種比較復雜，包括非洲伊蚊、辛普森伊蚊、趨血蚊屬（Hemagogus）、煞蚊屬（Sabethes）等，以猴-非洲伊蚊或趨血蚊屬等-猴的方式循環，人因進入叢林中被蚊叮咬而感染。

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我司還提供其它進口或國產試劑盒：登革熱、瘧疾、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產品。

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4. To carry out mosquito control
As with other mosquito-borne infectious diseases, reducing mosquito density is a key measure to control the epidemic. Once the case report is found, to immediay take to eliminate mosquito breeding ground, killing mosquitoes and other measures to control the density of the media to prevent the spread of the disease.
5. To improve the discovery and coping ability of yellow fever
Proposed conditional provincial CDC and port city CDC to establish laboratory testing techniques and methods to do the technical and reagent reserves.
Local health departments should organize the issuance of the relevant national technical guidelines to improve the medical staff found to yellow fever, the ability to identify and improve epidemiological investigation and disposal capacity epidemic disease control personnel.
Yellow fever is an acute infectious disease caused by yellow fever and transmitted through mosquitoes. Clinical manifestations of fever, yellow dye, bleeding and so on. The disease is mainly prevalent in tropical regions of Central and South America and Africa, through the mosquito and non-human primates between the periodic occurrence of natural infection cycle.
A, etiology
Yellow fever virus Flaviviridae belongs to Flavivirus, the virus particles are spherical, diameter 37-50 nm, outside the lipid capsule, the surface of the spinous process. The viral genome is a single stranded stranded RNA with a molecular weight of about 3.8 x 106. A typical yellow fever virus contains 10862 nucleotides consisting of a single reading frame of 10233 nucleotides and a shorter 5 'non-coding region and a non-coding region at the 3' end. Encoding three structural proteins and eight nonstructural proteins.
The viral E protein is the main envelope glycoprotein, containing the yellow fever virus hemagglutinin and neutralizing the antigenic determinant. M protein can cause increased infectivity of the virus and form the surface structure of the virus particles.
The virus resistance is weak, easy to heat, yellow fever, sodium deoxycholate and commonly used disinfectants such as rapid inactivation.
Yellow fever virus can be cross-serological response with other members of the Flaviviridae, such as dengue virus, West Nile virus, and St. Louis encephalitis virus.
Second, epidemiology
(A) the source of infection.
People who are infected with yellow fever and monkeys are the main source of infection. The main source of urban infection for patients and patients with hidden yellow fever, especially within 4 days of onset of patients. The main source of jungle is monkey and other non-human primates. Mosquito sucking the patient or the blood of the monkey after 9-12 days that is contagious. Infected mosquitoes can be poisoned for life and can be transmitted by the egg.
Yellow fever, hidden yellow fever and light cases are much more severe patients, these cases play a very important role in the spread of the disease.
(B) the way of transmission.
The disease spread through mosquito bites. Aedes aegypti is the only medium for urban yellow fever, with people - the Aedes aegyrus - the way people circulate. Jungle-type media mosquitoes are more complex, including Aedes aegypti, mosquitoes, Hemagogus, Sabethes, monkeys - Aedes aegypti or mosquitoes Circulation, people into the jungle by mosquito bites and infection.