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技術(shù)文章

Elisa試劑盒對血清鈣檢測

閱讀:429發(fā)布時間:2014-12-23

長期以來,關(guān)于很多項目間交叉污染已屢見報道,如ALT對LDH正干擾、CK對GLU正干擾等,甚至也有Ca對ALT交叉污染的報道,然而對于Ca受 到的干擾卻鮮見報端。
對18個項目進行Ca交叉污染初篩試驗,結(jié)果顯示有7個項目在常規(guī)檢測條件下對Ca的干擾率超過3%,對以上7個項目進行試劑交叉污染確證 試驗,結(jié)果與初篩試驗基本吻合。常規(guī)檢測項目確實可能對Ca產(chǎn)生負干擾性質(zhì)的交叉污染。
之所以只選擇各試劑的R1,是因為Ca為單試劑,將混合血清分出(N+1)份,每份100ul,*份加5Oul生理鹽水,其余n份分別加相應項目試劑(R1)50ul,測定ca,重復5次計算均值,*份結(jié)果為對照值A(chǔ)2

其中Ca采用偶氮胂Ⅲ法,TBIL和DBIL采用釩酸鹽法GLU采用氧化酶法,BUN采用*脫氫酶法,HDL.C和LDL.C采用直接法,其他都是IFCC推薦的常規(guī)方法。
 運行系統(tǒng)清洗后,單獨測定混合血清鈣(ca)計算均值為對照值A(chǔ)1。儀器為日本谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總*(TBIL)、直接*(DBIL);肌酐(cR)為上海將來公司、尿酸(uA)、尿素氮(BUN)、葡萄糖(GLU)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、α羥丁酸脫氫酶(HBD);二氧化碳(co2)、總*(Tc)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白*(HDL-c)、低密度脂蛋白*(LDL-c)。初篩交叉污染試驗。將生化儀上18項其他項目

分別與Ca配對組合測定,樣本為混合血清,重復5次計算均值,篩選出與對照值偏差(干擾率)≥3%的項目(數(shù)目為N)。由于ca的通道號在儀器上處于zui末位,反應時間也是各項目的zui大值10min,根據(jù)儀器檢測順序邏輯,Ca在任何組合中都是zui后開始檢測。這樣可以直接觀察各項目試劑對Ca的交叉污染影響程度。 將上一步篩選出N個項目做交叉污染確證試驗。
初篩試驗以TBIL(釩酸鹽法)、DBIL(釩酸鹽法)干擾zui大,而確證試驗則顯示ALT(IFCC速率法)、AST(IFCC速率法)影響zui大。

隨著*向高速度和樣本、試劑微量化發(fā)展,交叉污染尤其是試劑間的交叉污染越來越突出。
在等同的測定條件下,在本實驗眾多常規(guī)項目中為了消除微量重金屬導致的酶催化反應中的抑制作用,EDTA被廣泛應用于酶類試劑或有酶促反應的試劑配制,本實驗中試劑中可能含有較高濃度的EDTA,故對Ca造成了明顯的負干擾,Ca受到負干擾現(xiàn)象zui先被發(fā)現(xiàn),可見其抗*力較低,或存在Ca特異性污染源。
實驗證明,試劑可對Ca測定產(chǎn)生嚴重負干擾,是可能施污染項目。經(jīng)調(diào)查研究,可能是這些試劑中的螫合劑成份絡(luò)合樣品中的Ca所致。防范措施包括:加強儀器試劑針和攪拌棒清洗、增加試劑針清洗程序、變換項目檢測通道順序等。
為營造穩(wěn)定的反應環(huán)境,生化試劑常添加檸檬酸鹽等的螯合劑。有報道證實鎂(Mg)試劑中EGTA成份對Ca造成了負干擾。而在TBIL 和DBIL試劑中,同時含有EDTA和檸檬酸鹽,所以一旦污染,對Ca造成的負干擾尤其明顯。
由此可見,其抗*力本身就存在天然缺陷,再 置身于眾多潛在的污染源中間,遭受干擾的風險可想而知,必須引起實驗室的重視,并采取對策加以防范。


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