培養操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

產品參數：

商品詳細介紹：

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

大鼠 NTRK2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽盤基網柄（Dicyostelium）細胞趨化作用（chemotaxis）  10次

大鼠 NTRK2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽軟瓊脂檢測試劑盒  

小鼠 VDR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽細細胞趨化作用（chemotaxis）軟瓊脂檢測試劑盒  10次

小鼠 IL17A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽通用型細胞粘附性（cell adhesion）比色法檢測試劑盒  50次

小鼠 IL17A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽通用型細胞粘附性（cell adhesion）熒光檢測試劑盒  50次

小鼠 IL2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽通用型血液凝集分子纖維蛋白檢測法（Fibrometer）分析試劑盒  50次

小鼠 IL2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽肝素（heperin）纖維蛋白檢測法（Fibrometer）分析試劑盒  50次

小鼠 LIGHT / TNFSF14 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽肝素（heperin）活性比色法定量檢測試劑盒  20次

小鼠 LIGHT / TNFSF14 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽肝素（heperin）活性比色法定量檢測試劑盒  20次

小鼠 CCR2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽水蛭素（hirudin）纖維蛋白檢測法（Fibrometer）分析試劑盒  50次

小鼠 CCR2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽水蛭素（hirudin）活性比色法定量檢測試劑盒  20次

menin-mLL相互作用抑制劑(MI-503)phospho-IKK beta(Tyr199)  磷酸化KB抑制蛋白激β抗體 規格: 0.1ml

SSTR1  生抑素受體1抗體 規格: 0.1ml

TXNRD1  硫氧環蛋白還原1抗體 規格: 0.2mlMCK10/CD167a/DDR1  神經上皮酪激抗體（激10） 規格: 0.1ml

Cystatin E/M  半胱蛋白抑制劑6抗體 規格: 0.1ml

Histone H3 (mono methyl K79)  單甲基組蛋白H3K9抗體 規格: 0.2ml

RNF32  環指蛋白32抗體 規格: 0.2ml

BLAME/SLAMF8  BLAME抗體 規格: 0.1ml

NHLRC2  非霍奇金重復蛋白2抗體 規格: 0.2mlphospho-MEK5(Ser142)  磷酸化絲裂原活化蛋白激激5抗體 規格: 0.1ml

POC5  細胞中心粒蛋白抗體 規格: 0.2ml

KLHDC9  KLHDC9蛋白抗體 規格: 0.2ml

ACCN1/BNaC1/ASIC2  腦鈉通道蛋白1抗體 規格: 0.2mlTSPY1  睪特異定蛋白質編碼Y1抗體 規格: 0.1ml